【摘 要】
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目的 利用CRISPR-Cas9基因编辑技术验证与非小细胞肺癌转移相关的Trim72基因的敲除是否引起肝癌转移能力的变化.方法 建立稳定表达Cas9蛋白的小鼠肝癌细胞系Hepa1-6(Cas9),随
【机 构】
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天津-牛津基因治疗联合实验室, 天津医科大学基础医学研究中心,300070
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目的 利用CRISPR-Cas9基因编辑技术验证与非小细胞肺癌转移相关的Trim72基因的敲除是否引起肝癌转移能力的变化.方法 建立稳定表达Cas9蛋白的小鼠肝癌细胞系Hepa1-6(Cas9),随后利用针对Trim72基因的单导向RNA(sgRNA)进行特异性基因敲除获得Hepa1-6(Trim72-KO)细胞系,再通过体外Transwell实验和体内皮下瘤肺转移检测评估该细胞系的迁移和侵袭能力.结果 利用CRISPR-Cas9系统成功获得了Hepa1-6(Trim72-KO)细胞系.Transwell实验结果表明,敲除Trim72基因后,Hepa1-6(Cas9)细胞系的体外迁移和侵袭能力增强;体内皮下瘤肺转移病理检查结果显示,Hepa1-6(Trim72-KO)细胞系(实验组)所成皮下瘤的体内转移能力明显强于未转入相应sgRNA的Hepa1-6(Cas9)细胞系(对照组).结论 通过CRISPR-Cas9系统成功获得了敲除Trim72基因的Hepa1-6(Trim72-KO)细胞系,该细胞系表现出较Hepa1-6(Cas9)细胞系更强的侵袭和转移能力,说明Trim72基因可能在肝癌的侵袭和转移中起重要作用,有望成为肝癌基因治疗的潜在靶点.
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