山苍子油抗念珠菌的敏感性及作用机理的电镜研究

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目的应用美国国家临床试验标准化委员会(NCCLS)推荐的微量法测定山苍子油(Liseacubebaoil)对5种医学重要念珠菌的最小抑菌浓度,并在电镜下观察山苍子油作用后,耐唑类药物的克柔念珠菌(Candidakrusei)超微结构的改变,探讨其作用机制,从而为耐唑类药物的抗念珠菌中药开发提供依据。方法参照NCCLS(NCCLS-M27-T文件)推荐的抗真菌药物敏感试验方案微量稀释法检测5种念珠菌标准菌株,并以氟康唑作为质控药物。电镜下观察山苍子油作用前后克柔念珠菌超微结构的改变。结果山苍子油对5种标准菌株的最小抑菌浓度(MIC)分别为:白念珠菌(14.14±3.64)μg/mL,热带念珠菌(23.22±2.85)μg/mL,光滑念珠菌(31.24±2.88)μg/mL,近平滑念珠菌(76.19±4.40)μg/mL,克柔念珠菌(28.30±2.54)μg/mL。电镜观察发现,氟康唑处理组克柔念珠菌结构完整,其细胞壁、细胞膜结构清晰;山苍子油处理组见克柔念珠菌细胞壁溶解破坏,细胞膜连续性破坏,细胞器肿胀溶解乃至坏死溶解。结论山苍子油不仅对白念珠菌有抗菌作用,对其他致病菌种,特别是耐唑类药物的菌种如克柔念珠菌也有着类似的抗菌作用。山苍子油可能通过破坏克柔念珠菌的细胞壁、细胞膜的结构而抗真菌。 Objective To determine the minimum inhibitory concentration of Litsea lucidum (Liseacubebaoil) against 5 kinds of important Candida species by using the NCCLS recommended trace method and observe the effect of Litsea cubeba oil on oxazole resistance after electron microscopy. The ultrastructural changes of candida krusei were investigated and the mechanism of action was explored, which provided the basis for the development of anti-azole drugs against candida. Methods According to the NCCLS (NCCLS-M27-T document) recommended antifungal drug sensitivity test protocol microdilution method to detect five Candida standard strains, and fluconazole as a quality control drug. The ultrastructural changes of Candida krusei were observed under the electron microscope before and after the action of Litsea cubeba oil. Results The minimum inhibitory concentrations (MIC) of Litsea cubeba oil to the five standard strains were: Candida albicans (14.14±3.64) μg/mL, Candida tropicalis (23.22±2.85) μg/mL, Candida glabrata (31.24). ±2.88) μg/mL, Candida parapsilosis (76.19±4.40) μg/mL, Candida krusei (28.30±2.54) μg/mL. Electron microscopy showed that the fluconazole-treated group had a complete structure of Candida krusei with a clear cell wall and cell membrane structure. In the Litsea cubeba oil treatment group, cell walls of the Candida krusei were dissolved and destroyed, and the cell membranes were continuously disrupted. The organelles were swollen and dissolved and even dissolved. Conclusion Litsea cubeba oil not only has antibacterial effect against Candida albicans, but also has similar antibacterial effect on other pathogenic bacteria species, especially azole-resistant strains such as Candida krusei. Litsea cubeba oil may be resistant to fungi by destroying the cell wall and cell membrane structure of Candida krusei.
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