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【摘 要】 目的：建立二十五味余甘子丸中总鞣质的含量测定方法。方法：以没食子酸为对照品，磷钼钨酸为显色剂，检测波长760nm。结果：没食子酸的线性范围为1.024～10.24μg（r=0.9996），平均回收率99.2%，RSD=0.6% 。结论：该方法简单、准确、重复性好，可用于二十五味余甘子丸中总鞣质的含量测定。
【关键词】 二十五味余甘子丸；紫外分光光度法；总鞣质；含量测定
【中图分类号】R284.1 【文献标志码】 A【文章编号】1007-8517（2016）14-0013-02
Abstract：ObjectiveTo set up a method for determination total tannin in ershiwuwei yuganzi pill. Methods Gallic acid to be reference， and colored with Phos phorus molybdenum tungsten acid， the wavelength of detect was set at 760 nm. Results The linearity was obtained within the range of 1.024～10.240 μg （r=0.9996）；The average recovery（n=6） was 99.2%， and RSD was 0.6%. Conclusion The method is simple， accurate and repeatable. It could be adopted to determinate the total tannin in ershiwuwei yuganzi pill.
Keywords：ershiwuwei yuganzi pill； UV； total tannin； content determination
藏药二十五味余甘子丸为藏医传统验方，处方由余甘子、巴夏嘎、甘青兰等二十六味药材制成的复方制剂，临床用于多血症、高血压、肝胆疼痛、声哑目赤、口渴、口唇发紫、月经不调[1]。研究采用紫外分光光度法测定[2-3]十一批不同厂家的二十五味余甘子丸中总鞣质的含量，为其质量控制提供实验依据。
1 仪器与材料
1.1 仪器 TU1901双光速紫外可见分光光度计（北京普析通用公司）；XP205 微量电子天平（ 瑞士METTLER 公司）；KQ-250DE型数控超声波清洗器（昆山超声仪器有限公司）。
1.2 材料 没食子酸对照品（批号：110831-200803，中国药品生物制品检定所）；所用的试剂均为分析纯，二十五味余甘子丸样品（见表1）。
2 方法与结果
2.1 对照品溶液制备 精密称取没食子酸对照品11.36mg，置20mL棕色量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，精密量取5mL，置50mL棕色量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀，即得浓度为0.0512 mg/mL的没食子酸对照品溶液。
2.2 供试品溶液制备 精密称取供试品细粉2.0g，置250 mL棕色容量瓶中，加入30% 的甲醇溶液150mL，超声提取40 min，放冷，加30%甲醇稀释至刻度，摇匀，过滤，取续滤液20 mL，置100 mL棕色容量瓶中，加水至刻度，即得。
2.3 标准曲线的制备 精密量取浓度为0.0512mg/mL没食子酸对照品溶液0.5、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0 mL，分别置25 mL棕色量瓶中，各加入磷钼钨酸试液1 mL，再分别加水11.5、11、10、9、8、7 mL，用29% 碳酸钠溶液稀释至刻度，摇匀，放置30 min，以相应的试剂为空白，在760 nm 处测定吸光度。以吸光度为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线得回归方程Y=0.12163X+0.06147（r=0.9996），表明没食子酸在1.024～10.24μg范围内线性关系良好。
2.4 精密度试验 取供试品溶液（批号：101201）6份，分别制成供试品溶液，按照“2.3”项下方法操作，于760 nm 处测定吸光度，结果吸光度的相对标准偏差（RSD）为1.3%，说明仪器的精密度良好。
2.5 稳定性试验 精密吸取供试品溶液（批号：101201）1mL，按“2.3”项下方法操作，显色30 min后，每隔5min测定一次吸光度，共6次，计算（RSD）为1.2%（n=6），表明二十五味余甘子丸的鞣质在显色终止反应后30 min内测结果稳定。
2.6 回收率试验 取已知含量（批号：101201）的样品6 份，精密称取2.0g细粉，各加入没食子酸对照品20.0 mg，按照供试品溶液制备方法制备，并按“2.3”项下方法测定含量，结果6次测定的平均回收率为99.2%，RSD=0.6%，说明该测定方法回收率较好。见表2。
2.7 总鞣质含量测定
2.7.1 总酚 精密量取供试品溶液2mL，置25mL棕色量瓶中，加入磷钼钨酸试液1mL，再加水10mL，用29%碳酸钠溶液稀释至刻度，摇匀，放置30min，测定吸光度。
2.7.2 不被吸附的多酚 精密量取供试品溶液25mL，加至已盛有0.6g干酪素的100mL具塞锥形瓶中，密塞，于30℃水浴中保温1h，时时振摇，取出，放冷，摇匀，滤过，弃去初滤液，精密量取续滤液2mL，置25mL棕色量瓶中，加入磷钼钨酸试液1mL，再加水10mL，用29% 碳酸钠溶液稀释至刻度，摇匀，放置30min， 测定吸光度。结果见表3。
3 讨论
为了能够较为准确的测定总鞣质的含量，研究对供试品的制备方法进行了优选。通过比较水、50% 丙酮、30%甲醇超声提取制备的供试品中总鞣质的含量，发现50%丙酮和30%甲醇提取所得总鞣质含量最高，因此确定二十五味余甘子丸提取溶剂为30%的甲醇；而50%丙酮虽含量比30%甲醇高但是在试验过程中二十五味余甘子丸中有些药材在丙酮提取时对鞣质含量有影响。同时比较了超声提取和放置过夜提取两种提取方法，发现超声提取不仅提取完全，而且由于可以常温提取，不会影响鞣质的含量。因此，确定采用超声提取。
由于鞣质类化合物性质不稳定，所以对样品的制备、处理等均应考虑环境的影响，避免鞣质类化合物发生变化，如：样品制备和超声时注意温度的影响，提取液应避光保存，且宜迅速测定等。
参考文献
[1]国家药典委员会.中华人民共和国卫生部药品标准（藏药，第一册）[S]. 1995 ：148.
[2]国家药典委员会.中华人民共和国药典（一部）[S] . 北京：中国医药科技出版社，2010：62.
[3]孙中文，刘汉青，黄一平，等. 藏药余甘子中总鞣质和没食子酸的含量测定[J].现代中药研究与实践，2010，24（3）：60 .
（收稿日期：2016.04.26）
【关键词】 二十五味余甘子丸；紫外分光光度法；总鞣质；含量测定
【中图分类号】R284.1 【文献标志码】 A【文章编号】1007-8517（2016）14-0013-02
Abstract：ObjectiveTo set up a method for determination total tannin in ershiwuwei yuganzi pill. Methods Gallic acid to be reference， and colored with Phos phorus molybdenum tungsten acid， the wavelength of detect was set at 760 nm. Results The linearity was obtained within the range of 1.024～10.240 μg （r=0.9996）；The average recovery（n=6） was 99.2%， and RSD was 0.6%. Conclusion The method is simple， accurate and repeatable. It could be adopted to determinate the total tannin in ershiwuwei yuganzi pill.
Keywords：ershiwuwei yuganzi pill； UV； total tannin； content determination
藏药二十五味余甘子丸为藏医传统验方，处方由余甘子、巴夏嘎、甘青兰等二十六味药材制成的复方制剂，临床用于多血症、高血压、肝胆疼痛、声哑目赤、口渴、口唇发紫、月经不调[1]。研究采用紫外分光光度法测定[2-3]十一批不同厂家的二十五味余甘子丸中总鞣质的含量，为其质量控制提供实验依据。
1 仪器与材料
1.1 仪器 TU1901双光速紫外可见分光光度计（北京普析通用公司）；XP205 微量电子天平（ 瑞士METTLER 公司）；KQ-250DE型数控超声波清洗器（昆山超声仪器有限公司）。
1.2 材料 没食子酸对照品（批号：110831-200803，中国药品生物制品检定所）；所用的试剂均为分析纯，二十五味余甘子丸样品（见表1）。
2 方法与结果
2.1 对照品溶液制备 精密称取没食子酸对照品11.36mg，置20mL棕色量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，精密量取5mL，置50mL棕色量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀，即得浓度为0.0512 mg/mL的没食子酸对照品溶液。
2.2 供试品溶液制备 精密称取供试品细粉2.0g，置250 mL棕色容量瓶中，加入30% 的甲醇溶液150mL，超声提取40 min，放冷，加30%甲醇稀释至刻度，摇匀，过滤，取续滤液20 mL，置100 mL棕色容量瓶中，加水至刻度，即得。
2.3 标准曲线的制备 精密量取浓度为0.0512mg/mL没食子酸对照品溶液0.5、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0 mL，分别置25 mL棕色量瓶中，各加入磷钼钨酸试液1 mL，再分别加水11.5、11、10、9、8、7 mL，用29% 碳酸钠溶液稀释至刻度，摇匀，放置30 min，以相应的试剂为空白，在760 nm 处测定吸光度。以吸光度为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线得回归方程Y=0.12163X+0.06147（r=0.9996），表明没食子酸在1.024～10.24μg范围内线性关系良好。
2.4 精密度试验 取供试品溶液（批号：101201）6份，分别制成供试品溶液，按照“2.3”项下方法操作，于760 nm 处测定吸光度，结果吸光度的相对标准偏差（RSD）为1.3%，说明仪器的精密度良好。
2.5 稳定性试验 精密吸取供试品溶液（批号：101201）1mL，按“2.3”项下方法操作，显色30 min后，每隔5min测定一次吸光度，共6次，计算（RSD）为1.2%（n=6），表明二十五味余甘子丸的鞣质在显色终止反应后30 min内测结果稳定。
2.6 回收率试验 取已知含量（批号：101201）的样品6 份，精密称取2.0g细粉，各加入没食子酸对照品20.0 mg，按照供试品溶液制备方法制备，并按“2.3”项下方法测定含量，结果6次测定的平均回收率为99.2%，RSD=0.6%，说明该测定方法回收率较好。见表2。
2.7 总鞣质含量测定
2.7.1 总酚 精密量取供试品溶液2mL，置25mL棕色量瓶中，加入磷钼钨酸试液1mL，再加水10mL，用29%碳酸钠溶液稀释至刻度，摇匀，放置30min，测定吸光度。
2.7.2 不被吸附的多酚 精密量取供试品溶液25mL，加至已盛有0.6g干酪素的100mL具塞锥形瓶中，密塞，于30℃水浴中保温1h，时时振摇，取出，放冷，摇匀，滤过，弃去初滤液，精密量取续滤液2mL，置25mL棕色量瓶中，加入磷钼钨酸试液1mL，再加水10mL，用29% 碳酸钠溶液稀释至刻度，摇匀，放置30min， 测定吸光度。结果见表3。
3 讨论
为了能够较为准确的测定总鞣质的含量，研究对供试品的制备方法进行了优选。通过比较水、50% 丙酮、30%甲醇超声提取制备的供试品中总鞣质的含量，发现50%丙酮和30%甲醇提取所得总鞣质含量最高，因此确定二十五味余甘子丸提取溶剂为30%的甲醇；而50%丙酮虽含量比30%甲醇高但是在试验过程中二十五味余甘子丸中有些药材在丙酮提取时对鞣质含量有影响。同时比较了超声提取和放置过夜提取两种提取方法，发现超声提取不仅提取完全，而且由于可以常温提取，不会影响鞣质的含量。因此，确定采用超声提取。
由于鞣质类化合物性质不稳定，所以对样品的制备、处理等均应考虑环境的影响，避免鞣质类化合物发生变化，如：样品制备和超声时注意温度的影响，提取液应避光保存，且宜迅速测定等。
参考文献
[1]国家药典委员会.中华人民共和国卫生部药品标准（藏药，第一册）[S]. 1995 ：148.
[2]国家药典委员会.中华人民共和国药典（一部）[S] . 北京：中国医药科技出版社，2010：62.
[3]孙中文，刘汉青，黄一平，等. 藏药余甘子中总鞣质和没食子酸的含量测定[J].现代中药研究与实践，2010，24（3）：60 .
（收稿日期：2016.04.26）