短小芽孢杆菌(Bacillus pumilus)DX01转座突变株的构建及转化体系的优化

来源 :上海交通大学学报(农业科学版) | 被引量 : 0次 | 上传用户:hellen
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Tn5转座子及其衍生载体被广泛应用于革兰氏阴性菌的基因功能研究,但尚未见有利用Tn5转座子导入革兰氏阳性菌短小芽孢杆菌(Bacillus pumilus)DX01菌株的报道。本研究通过构建Tn5转座载体,对短小芽孢杆菌DX01菌株进行了Tn5转座插入诱变,获得了大量的突变株。同时,考察了感受态细胞培养浓度、电击电压、电击缓冲液及复苏培养基的选择等对DX01电转化效果的影响,建立了实验条件下的最佳电转条件。从1 109个转化子中随机抽取20个继代培养15代后,进行了稳定性分析;对转化子的PCR及Southe
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