【摘 要】
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目的 克隆结核分枝杆菌（Mycobacterium tuberculosis,MTB）PE＿PGRS35基因，构建pET28a-PE＿PGRS35重组表达载体，异源表达并纯化MTB H37Rv的PE＿PGRS35蛋白，经生物信息学分析后，探讨抗MTB新型靶点。方法 PCR扩增PE＿PGRS35编码基因，利用重组克隆技术，构建表达载体pET28a-PE＿PGRS35，测序鉴定成功后转化至大肠埃希菌（
【机 构】
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蚌埠医学院检验医学院检验医学实验中心
【基金项目】
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安徽省自然科学基金（1908085MH252,2008085QH405）；
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目的 克隆结核分枝杆菌（Mycobacterium tuberculosis,MTB）PE＿PGRS35基因，构建pET28a-PE＿PGRS35重组表达载体，异源表达并纯化MTB H37Rv的PE＿PGRS35蛋白，经生物信息学分析后，探讨抗MTB新型靶点。方法 PCR扩增PE＿PGRS35编码基因，利用重组克隆技术，构建表达载体pET28a-PE＿PGRS35，测序鉴定成功后转化至大肠埃希菌（E. coli）BL21（DE3）中，加入异丙基-β-D半乳糖苷（IPTG）进行诱导表达。用Ni柱亲和层析纯化PE＿PGRS35蛋白，并对其进行生物信息学分析。结果 经测序证明pET28a-PE＿PGRS35表达载体构建正确，表达的PE＿PGRS35蛋白相对分子质量约53 000，主要以包涵体形式存在，纯度达90%。生物信息学分析表明，PE＿PGRS35蛋白为酸性不稳定性蛋白，主要二级结构为β-折叠和无规则卷曲，无跨膜区，推测为膜外蛋白，有39个磷酸化位点和2个保守结构域，有Rv1769、PPE8、PPE64、PPE54、PPE24、PPE16、PPE35、PPE6、PPE28、PE2共10个蛋白与PE＿PGRS35蛋白相互作用。结论 成功获得高纯度的PE＿PGRS35蛋白，为进一步开发抗MTB药物新型靶点提供了参考。
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