【摘 要】
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应用RT-PCR扩增猪传染性胃肠炎病毒SC-H株N基因,将扩增的N基因克隆到pMD18-T载体中,进行BamHⅠ和SalⅠ双酶切鉴定,将获得的N基因片段以pET32a(+)载体进行亚克隆,构建了pET32-N重
【基金项目】
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四川省重点科技攻关资助项目(01NG018-01),教育部长江学者和创新团队发展计划资助项目(IRT0555-9)
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应用RT-PCR扩增猪传染性胃肠炎病毒SC-H株N基因,将扩增的N基因克隆到pMD18-T载体中,进行BamHⅠ和SalⅠ双酶切鉴定,将获得的N基因片段以pET32a(+)载体进行亚克隆,构建了pET32-N重组表达质粒并进行鉴定。将pET32-N重组质粒转化BL21(DE3)大肠杆菌中进行表达,并对表达条件进行了选择,对表达产物进行了定位和纯化。结果表明,N基因全长1149 bp,编码382个氨基酸,克隆的N基因包含完整的阅读框且能在大肠杆菌中正确表达,表达的最佳IPTG诱导浓度为0.8 mmol/L,
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