【摘 要】
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为了实现在体外制备巨细胞病毒-免疫球蛋白M（CMV-IgM）和探讨不同信号肽对CMV-IgM表达的影响,通过RLM-RACE技术钓取杂交瘤细胞基因序列,构建人鼠嵌合CMV-IgM表达载体,并通过PCR方法将5种不同的分泌型信号肽（SigA–SigE）代替CMV-IgM自身信号肽（SigF）,利用中国仓鼠卵巢细胞（CHO）作为宿主细胞进行体外表达。对纯化后的CMV-IgM进行SDS-PAGE、SEC
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为了实现在体外制备巨细胞病毒-免疫球蛋白M（CMV-IgM）和探讨不同信号肽对CMV-IgM表达的影响,通过RLM-RACE技术钓取杂交瘤细胞基因序列,构建人鼠嵌合CMV-IgM表达载体,并通过PCR方法将5种不同的分泌型信号肽（SigA–SigE）代替CMV-IgM自身信号肽（SigF）,利用中国仓鼠卵巢细胞（CHO）作为宿主细胞进行体外表达。对纯化后的CMV-IgM进行SDS-PAGE、SEC-HPLC和酶联免疫吸附试验（ELISA）确定其蛋白表达水平与免疫反应性,最终成功制备出910 kDa的重组蛋白,且研究表明,5种信号肽（SigA–SigE）的人鼠嵌合CMV-IgM表达量较CMV 6#细胞株自身信号肽SigF相比,分别提高了6.72、5.19、1.44、1.85、1.98倍。这将对人鼠嵌合CMV-IgM的开发提供理论基础,且为提高CMV-IgM表达量的研究工作提供了新思路。
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