【摘 要】
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目的 探索人骨髓来源多能成体祖细胞(ZHJ-MAPC)在与人肝细胞系L02在体外共培养条件下诱导分化为肝细胞的可行性.方法 (1)间接共培养:将ZHJ-MAPC和人肝细胞系L02仅培养液相通
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目的 探索人骨髓来源多能成体祖细胞(ZHJ-MAPC)在与人肝细胞系L02在体外共培养条件下诱导分化为肝细胞的可行性.方法 (1)间接共培养:将ZHJ-MAPC和人肝细胞系L02仅培养液相通行间接共培养.分别于培养第1、3、5、7天应用免疫细胞化学法鉴定ZHJ-MAPC的白蛋白、甲胎蛋白(AFP)、细胞角蛋白-18(CK-18)、细胞角蛋白-19(CK-19)等肝细胞特征性表型的表达情况.(2)直接共培养:将荧光染料羧基荧光素二醋酸盐琥珀酰亚胺酯(CFSE,绿色)标记的ZHJ-MAPC与L02细胞(均为1×104 个/ml)按照各50%比例混合行直接共培养.5 d后采用荧光免疫细胞化学SABC-Cy3法(红色)双标后在激光共聚焦显微镜下分别观察ZHJ-MAPC表达白蛋白、AFP、CK-18的情况.结果 (1)间接共培养结果:AFP在ZHJ-MAPC间接共培养第1天即表现为强阳性,随后表达逐渐减弱;白蛋白在第5天达到高峰;CK-18在第5天开始出现阳性,第7天出现较强表达.CK-19在各时间点均为阴性.(2)直接共培养结果:共培养第5天在检测白蛋白和CK-18表达情况时呈黄色荧光的阳性细胞即向肝细胞分化的ZHJ-MAPC出现较多,而AFP阳性表达则较少.结论 人骨髓来源的ZHJ-MAPC与人肝细胞系L02行间接或直接共培养均能够诱导其向成熟肝样细胞定向分化.
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