【摘 要】
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目的研究建立抗CTLA4单抗质谱表征方法。方法以抗CTLA4单抗为研究对象,利用液相色谱-串联质谱联用技术（LC-MS/MS）,通过优化液相条件与质谱参数,应用液质联用技术从完整蛋白相对分子质量、亚基相对分子质量、氨基酸序列覆盖率、二硫键、糖基化位点、N糖基化修饰等方面对抗CTLA4单抗进行全面的表征。结果抗CTLA4单抗完整相对分子质量（主要糖型,A2G0F/A2G0F）约为147 992;去糖
【机 构】
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中国食品药品检定研究院卫生部生物技术产品检定及标准化重点实验室
【基金项目】
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科技重大专项项目资助（2018ZX09101001-003-001）；
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目的研究建立抗CTLA4单抗质谱表征方法。方法以抗CTLA4单抗为研究对象,利用液相色谱-串联质谱联用技术（LC-MS/MS）,通过优化液相条件与质谱参数,应用液质联用技术从完整蛋白相对分子质量、亚基相对分子质量、氨基酸序列覆盖率、二硫键、糖基化位点、N糖基化修饰等方面对抗CTLA4单抗进行全面的表征。结果抗CTLA4单抗完整相对分子质量（主要糖型,A2G0F/A2G0F）约为147 992;去糖完整相对分子质量为145 103;轻链相对分子质量为23 450,重链相对分子质量（主要糖型,A2G0F）为50 548;重链Fd段相对分子质量为25 355,重链sFc段（A2G0F,1 xKLoss） 25 189。使用Trypsin&Chymotrypsin分别进行蛋白酶解,单抗氨基酸序列覆盖率为100%; 16对二硫键全部得到鉴定,与理论二硫键连接方式一致; N糖基化修饰所在的肽段序列为EEQYNSTYR,N-糖基化修饰位点位于重链的第298位天冬酰胺残基上,有13种主要糖型,包括A2G0F（59.8%）、A2G1Fa（18.66%）、A2G1Fb（7.28%）、A2G2F（3.2%）、M5（1.66%）、A2S1G0F（1.17%）、A1G0F （1.16%）、A3G1F （0.95%）、A2G0 （0.94%）、A2S2F （0.78%）、A2S1G1F（0.67%）、A3G0F（0.53%）和A1G1F（0.51%）。结论建立了基于质谱技术对CTLA4单抗系统的表征分析方法。
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