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目的
观察柚皮苷通过Wnt/β-连环蛋白(β-catenin)通路对人退变椎间盘髓核细胞凋亡的影响。
方法对体外培养的人退变椎间盘髓核细胞染色鉴定后，分别用柚皮苷0 μg/ml(对照组)、10、20、40、80、100 μg/ml的培养基培养48 h，细胞计数试剂盒(CCK-8)及流式细胞法选择其抑制人退变椎间盘髓核细胞凋亡的最佳浓度。实时定量反转录聚合酶链反应(RT-qPCR)检测β-catenin、细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)、c-Myc癌基因(c-Myc)表达。酶联免疫吸附试验(ELISA)检测B淋巴细胞瘤-2(bcl-2)、bcl-2相关X蛋白(bax)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)、Ⅱ型胶原及蛋白聚糖表达。Western blot检测Ⅱ型胶原蛋白及蛋白聚糖表达。
结果细胞染色结果均为阳性。CCK-8及流式细胞法测定20 μg/ml柚皮苷为抑制人髓核细胞凋亡的最佳浓度。RT-qPCR检测显示，在人退变椎间盘髓核细胞(对照组)中，与正常髓核细胞比较，β-catenin基因过表达，Cyclin D1、c-Myc基因表达下调。加入20 μg/ml柚皮苷后，可以明显抑制β-catenin基因的表达(P＝0.000)，促进Cyclin D1、c-Myc基因表达(P＝ 0.000、0.001)。ELISA显示，20 μg/ml柚皮苷可以明显上调bcl-2、蛋白聚糖及Ⅱ型胶原蛋白表达(P＝0.001、0.000、0.023)，下调bax、Caspase-3蛋白表达(P＝0.001、0.001)，并可以促进Ⅱ型胶原蛋白及蛋白聚糖表达。
结论柚皮苷可能通过调控Wnt/β-catenin信号通路和线粒体凋亡通路抑制人退变椎间盘髓核细胞凋亡。