【摘 要】
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目的:构建人端粒酶逆转录酶(human telomerase reverse transcriptase,hTERT)启动子调控的异种移植抗原α-1,3半乳糖基转移酶(α-1,3 galactosyltransferase, α-1,3GT)基因
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目的:构建人端粒酶逆转录酶(human telomerase reverse transcriptase,hTERT)启动子调控的异种移植抗原α-1,3半乳糖基转移酶(α-1,3 galactosyltransferase, α-1,3GT)基因真核表达载体,研究其调控的α-1,3GT在肿瘤细胞中的靶向表达.方法:将前期克隆并测序正确的猪α-1,3GT基因定向克隆到pEGFP-hTERTp质粒中, 构建α-1,3GT真核表达载体pEGFP-hTERTp-GT.分别将pEGFP-hTERTp-GT和CMV启动子调控的α-1,3GT真核表达质粒pEGFP-N1-GT转染端粒酶阳性的人肺癌细胞A549及端粒酶阴性的正常人胚肺成纤维细胞MRC-5.RT-PCR检测转染细胞中α-1,3GT mRNA的表达,免疫荧光法和流式细胞仪检测α-gal抗原的表达.结果:成功构建了pEGFP-hTERTp-GT真核表达载体.转染pEGFP-N1-GT的A549和MRC-5中均有α-1,3GT mRNA的表达;转染pEGFP-hTERTp-GT的A549中有α-1,3GT mRNA的表达,而端粒酶阴性的MRC-5细胞中无α-1,3GT mRNA的表达.转染pEGFP-N1-GT的A549和MRC-5中均可表达异种移植抗原α-gal;转染pEGFP-hTERTp-GT质粒的A549中有α-gal的表达,而MRC-5细胞中无α-gal的表达(P
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