【摘 要】
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目的 探讨人内皮型一氧化氮合成酶基因(heNOS)转染抑制人血管平滑肌细胞(HVSMCs)增殖的机制.方法 以AdCMV-heNOS病毒感染复数分别为50、150、250、300、450 MOI,转染HVSMCs,
【机 构】
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卫生部北京医院血管外科,复旦大学附属中山医院血管外科
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目的 探讨人内皮型一氧化氮合成酶基因(heNOS)转染抑制人血管平滑肌细胞(HVSMCs)增殖的机制.方法 以AdCMV-heNOS病毒感染复数分别为50、150、250、300、450 MOI,转染HVSMCs,放射免疫法检测转染HVSMCs中的环一磷酸鸟苷(cGMP)的表达变化;Western blot检测血管平滑肌细胞中p21、p27蛋白的变化,流式细胞术分析对细胞周期分布及凋亡的影响.结果 (1)转染120 h,A570值分别为1.410±0.081、1.357±0.150、1.303±0.311、0.995±0.248、0.731±0.101,其中感染复数300 MOI明显稳定抑制血管平滑肌细胞的增殖.(2)转染72 h,未转染组、Ad-LacZ转染组、Ad-heNOS转染组cGMP的含量分别为(7.91±0.39)、(8.36±0.34)、(12.89±2.06)μnol/L,差异有统计学意义(P<0.01).(3)转染48 h,Westem blot检测转染组p27、p21表达明显上调,而未转染组虽也有p21、p27的表达,但两组差异有统计学意义(P<0.05).(4)无血清转染48 h后血清刺激24 h,未转染组、Ad-LacZ转染组、Ad-heNOS转染组G0/G1期分别为(64.23±1.58)%、(64.96±1.36)%、(76.03±2.27)%,差异有统计学意义(P<0.01).(5)转染3 d,第1天,未转染组、Ad-LacZ转染组、Ad-heNOS转染组细胞凋亡率分别为(4.70±0.56)%、(5.53±0.74)%、(8.53±1.06)%,差异无统计学意义(P>0.05).第3天,细胞凋亡率分别为(5.40±0.62)%、(8.30±0.80)%、(9.30±0.90)%,差异无统计学意义(P>0.05).结论 heNOS基因转染HVSMCs抑制细胞增殖,通过p21、p27上调导致细胞周期的阻滞,无诱导细胞凋亡.
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