【摘 要】
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目的利用大肠杆菌表达体系制备冠蛋白6(Coronin 6),探讨其表达、纯化和复性的条件与方法。方法构建Coronin 6基因过表达载体,转化大肠杆菌BL21(DE3)进行诱导表达,对纯化得到
【机 构】
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徐州医科大学江苏省麻醉学重点实验室; 徐州医科大学麻醉学院;
【基金项目】
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国家自然科学基金(81600969);江苏省大学生创新创业训练计划(201710313031Y)
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目的利用大肠杆菌表达体系制备冠蛋白6(Coronin 6),探讨其表达、纯化和复性的条件与方法。方法构建Coronin 6基因过表达载体,转化大肠杆菌BL21(DE3)进行诱导表达,对纯化得到的蛋白质进行复性,利用镍亲和层析柱和分子筛层析柱进行纯化,SDS-PAGE检测蛋白质表达和复性情况。结果成功构建Coronin 6过表达载体;Coronin 6在大肠杆菌BL21(DE3)中能够大量表达,表达条件为37℃、异丙基-β-D-硫代半乳糖苷0.1mmol/L诱导6h,Coronin 6以包涵体的形成存在。SDS-PAGE分析表明,Coronin 6蛋白质能够充分溶解于8mol/L的尿素中,其分子量为52.9kDa。对Coronin 6进行纯化和复性,获得较高纯度(>90%)的Coronin 6活性蛋白质,经纯化后能稳定存在于凝胶层析缓冲液中,每升LB培养基可获得纯度较高的蛋白质2.1mg。结论获得纯度较高的Coronin 6活性蛋白质,克隆并建立Coronin 6蛋白在大肠杆菌中表达、纯化和复性的条件。
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