研究微小RNA-34a(miR-34a)对葡萄膜黑色素瘤细胞生物学行为的影响及其机制。
方法采用葡萄膜黑色素瘤M23细胞作为研究对象，在细胞中分别转染miR-34a mimics和mimics阴性对照，分别记作miR-34a转染组和阴性对照组，设置不转染的细胞为正常对照组。采用real-time PCR法检测转染后miR-34a过表达效果，MTT法检测细胞增生情况，Transwell小室试验检测细胞侵袭和迁移。靶基因预测库预测miR-34a的靶基因，荧光素酶报告载体鉴定靶基因，real-time PCR和Western blot法检测靶基因的mRNA和蛋白表达。在M23细胞中共转染miR-34a mimics和小眼畸形相关转录因子(MITF)过表达载体，采用MTT法和Transwell小室试验分别检测细胞增生、侵袭和迁移能力变化，real-time PCR和Western blot法检测MITF mRNA和蛋白表达。
结果转染miR-34a mimics后的M23细胞中miR-34a表达水平升高。正常对照组、阴性对照组和miR-34a转染组间细胞增生值、侵袭细胞数目和迁移细胞数目总体比较，差异均有统计学意义(F＝18.000，P＝0.003；F＝20.345，P＝0.002；F＝15.717，P＝0.004)，其中miR-34a转染组较正常对照组、阴性对照组细胞增生值减小，侵袭细胞数目和迁移细胞数目减少，差异均有统计学意义(均P<0.05)。靶基因预测库及荧光素酶活性报告基因载体显示，MITF为miR-34a的靶基因。miR-34a转染组MITF mRNA和MITF蛋白的相对表达量分别为0.45±0.06和0.36±0.04，阴性对照组分别为0.99±0.11和0.62±0.05，正常对照组分别为1.00±0.07和0.63±0.08，miR-34a转染组MITF mRNA和蛋白表达水平明显低于阴性对照组和正常对照组，差异均有统计学意义(均P<0.05)。miR-34a＋MITF组细胞增生值(A570)、侵袭细胞数目和迁移细胞数目分别为0.35±0.02、(29.48±3.20)个和(41.87±5.82)个，明显高于miR-34a＋Vector组的0.26±0.03、(18.53±1.47)个和(27.64±2.45)个，差异均有统计学意义(均P<0.05)。
结论miR-34a具有抑制葡萄膜黑色素瘤细胞恶性表型的作用，其作用机制与抑制靶基因MITF的表达有关。