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摘要：目的 建立养血愈风颗粒中芍药苷的含量测定方法。方法 采用高效液相色谱法，色谱柱为Dikma Diamonsil C18柱（250 mm×4.6 mm，5 ?m），流动相为乙腈-0.1%磷酸水溶液（14∶86），检测波长为230 nm，流速为1.0 mL/min，柱温为30 ℃。结果 芍药苷在0.122 4～1.224 ?g（r=0.999 9）范围内呈现良好的线性关系，平均加样回收率为98.85%， RSD=1.66%（n=6）。结论 本方法简便易行、准确可靠、专属性强，可作为养血愈风颗粒的质量控制方法。
关键词：养血愈风颗粒；芍药苷；含量测定；高效液相色谱法
中图分类号：R284.1 文献标识码：A 文章编号：1005-5304（2013）02-0055-02
养血愈风颗粒是由白芍、熟地黄、当归、山茱萸、枸杞子等中药组成的院内复方制剂（成都中医药大学附属医院，原剂型为汤剂），具有滋阴养血、抗炎止痒之功效，并能改善局部血液循环，提高机体免疫功能[1]，主要用于治疗外阴营养不良等妇科疾病。白芍为该颗粒剂主药之一，其主要有效成分为芍药苷。本研究采用高效液相色谱法（HPLC）对芍药苷的含量进行测定，进而为制定该制剂的质量标准提供依据。
1 仪器与试药
Agilent 1200 型高效液相色谱仪；Sartorius BS210S电子天平，北京赛多利斯天平有限公司；Mettler Toledo超越系列专业型XS分析天平，梅特勒-托利多（上海）有限公司；KQ 3200 E型超声波清洗器，昆山市超声仪器有限公司。
芍药苷对照品，中国药品生物制品检定所提供，批号110736-201035，供含量测定用；养血愈风颗粒，成都中医药大学附属医院提供，批号20111219、20120225、20120312、20120316。乙腈为色谱纯，水为超纯水，其余试剂均为分析纯。
2 方法与结果
2.2 对照品溶液的制备
2.3 供试品溶液的制备
2.4 阴性对照溶液的制备
按处方比例，取除白芍外的其他药材，照养血愈风颗粒生产工艺制备阴性样品制剂，再按“2.3”项下方法制成阴性对照溶液。
2.5 专属性考察试验
2.7 精密度试验
2.8 稳定性试验
2.9 重复性试验
2.10 加样回收率试验
2.11 样品含量测定
3 讨论
本试验考察了回流提取、超声提取以及温浸提取3种提取方法，结果超声提取法明显优于回流提取法与温浸提取法；进而分别考察了提取溶剂（甲醇、无水乙醇、稀乙醇）、提取溶剂用量（25、35、50 mL）、提取时间（20、30、40 min）对芍药苷提取效果的影响，结果发现甲醇的提取率明显高于无水乙醇和稀乙醇[2]，且采用甲醇35 mL、超声提取30 min时，即能将样品中芍药苷提取完全。
参考相关文献[3-4]，本试验对流动相种类及比例进行了考察，分别按照乙腈-水（20∶80）、乙腈-0.1%磷酸水溶液（20∶80）、乙腈-0.1%磷酸水溶液（14∶86）进行洗脱。结果显示，采用乙腈-水（20∶80）洗脱，芍药苷峰分离度较差、拖尾现象严重且基线不平稳[5]；采用乙腈-0.1%磷酸水溶液（20∶80）洗脱，芍药苷峰保留时间明显缩短，但是峰型较差且对称因子也不符合要求；采用乙腈-0.1%磷酸水溶液（14∶86）洗脱，主峰峰型得到明显改善且分离度较好，杂峰集中，基线平稳，故优选乙腈-0.1%磷酸水溶液（14∶86）为流动相。
本试验采用HPLC测定养血愈风颗粒中芍药苷的含量，由方法学考察可见，该方法精密度高，稳定性和重复性好，阴性无干扰且回收率较理想，故本法简便、灵敏、准确，为该颗粒剂质量控制提供了一定依据。
参考文献：
[1] 谢萍.杨家林教授治疗外阴白色病损30例临床分析[J].中国中医急症， 2007，16（7）：838.
[2] 陈世虎，陈志成.高效液相色谱法测定排石利胆片中芍药苷的含量[J].中国中医药信息杂志，2011，18（2）：57-58.
[3] 陈艳霞.HPLC测定九味乳安糖浆中芍药苷的含量[J].中成药，2008， 30（9）：23-24.
[4] 国家药典委员会.中华人民共和国药典：一部[S].北京：中国医药科技出版社，2010：96-97.
[5] 胡正明，葛婷婷，荆露，等.HPLC测定大柴胡颗粒中芍药苷的含量[J].南京中医药大学学报，2011，27（6）：589-590.
（收稿日期：2012-06-27，编辑：陈静）
关键词：养血愈风颗粒；芍药苷；含量测定；高效液相色谱法
中图分类号：R284.1 文献标识码：A 文章编号：1005-5304（2013）02-0055-02
养血愈风颗粒是由白芍、熟地黄、当归、山茱萸、枸杞子等中药组成的院内复方制剂（成都中医药大学附属医院，原剂型为汤剂），具有滋阴养血、抗炎止痒之功效，并能改善局部血液循环，提高机体免疫功能[1]，主要用于治疗外阴营养不良等妇科疾病。白芍为该颗粒剂主药之一，其主要有效成分为芍药苷。本研究采用高效液相色谱法（HPLC）对芍药苷的含量进行测定，进而为制定该制剂的质量标准提供依据。
1 仪器与试药
Agilent 1200 型高效液相色谱仪；Sartorius BS210S电子天平，北京赛多利斯天平有限公司；Mettler Toledo超越系列专业型XS分析天平，梅特勒-托利多（上海）有限公司；KQ 3200 E型超声波清洗器，昆山市超声仪器有限公司。
芍药苷对照品，中国药品生物制品检定所提供，批号110736-201035，供含量测定用；养血愈风颗粒，成都中医药大学附属医院提供，批号20111219、20120225、20120312、20120316。乙腈为色谱纯，水为超纯水，其余试剂均为分析纯。
2 方法与结果
2.2 对照品溶液的制备
2.3 供试品溶液的制备
2.4 阴性对照溶液的制备
按处方比例，取除白芍外的其他药材，照养血愈风颗粒生产工艺制备阴性样品制剂，再按“2.3”项下方法制成阴性对照溶液。
2.5 专属性考察试验
2.7 精密度试验
2.8 稳定性试验
2.9 重复性试验
2.10 加样回收率试验
2.11 样品含量测定
3 讨论
本试验考察了回流提取、超声提取以及温浸提取3种提取方法，结果超声提取法明显优于回流提取法与温浸提取法；进而分别考察了提取溶剂（甲醇、无水乙醇、稀乙醇）、提取溶剂用量（25、35、50 mL）、提取时间（20、30、40 min）对芍药苷提取效果的影响，结果发现甲醇的提取率明显高于无水乙醇和稀乙醇[2]，且采用甲醇35 mL、超声提取30 min时，即能将样品中芍药苷提取完全。
参考相关文献[3-4]，本试验对流动相种类及比例进行了考察，分别按照乙腈-水（20∶80）、乙腈-0.1%磷酸水溶液（20∶80）、乙腈-0.1%磷酸水溶液（14∶86）进行洗脱。结果显示，采用乙腈-水（20∶80）洗脱，芍药苷峰分离度较差、拖尾现象严重且基线不平稳[5]；采用乙腈-0.1%磷酸水溶液（20∶80）洗脱，芍药苷峰保留时间明显缩短，但是峰型较差且对称因子也不符合要求；采用乙腈-0.1%磷酸水溶液（14∶86）洗脱，主峰峰型得到明显改善且分离度较好，杂峰集中，基线平稳，故优选乙腈-0.1%磷酸水溶液（14∶86）为流动相。
本试验采用HPLC测定养血愈风颗粒中芍药苷的含量，由方法学考察可见，该方法精密度高，稳定性和重复性好，阴性无干扰且回收率较理想，故本法简便、灵敏、准确，为该颗粒剂质量控制提供了一定依据。
参考文献：
[1] 谢萍.杨家林教授治疗外阴白色病损30例临床分析[J].中国中医急症， 2007，16（7）：838.
[2] 陈世虎，陈志成.高效液相色谱法测定排石利胆片中芍药苷的含量[J].中国中医药信息杂志，2011，18（2）：57-58.
[3] 陈艳霞.HPLC测定九味乳安糖浆中芍药苷的含量[J].中成药，2008， 30（9）：23-24.
[4] 国家药典委员会.中华人民共和国药典：一部[S].北京：中国医药科技出版社，2010：96-97.
[5] 胡正明，葛婷婷，荆露，等.HPLC测定大柴胡颗粒中芍药苷的含量[J].南京中医药大学学报，2011，27（6）：589-590.
（收稿日期：2012-06-27，编辑：陈静）