探讨bufalin通过细胞外信号调节激酶(ERK)/P90核糖体S6激酶2(RSK2)通路对裸鼠移植瘤增殖及凋亡的影响。
方法建立裸鼠食管癌细胞移植瘤模型，并分为模型组、bufalin低剂量组、bufalin中剂量组、bufalin高剂量组、PD98059组和联合用药组，观察bufalin对裸鼠食管癌移植瘤的影响，显微镜下观察各组移植瘤的组织学表现。采用原位末端转移酶标记技术(TUNEL)检测各组移植瘤的凋亡指数，采用实时定量PCR法检测各组移植瘤组织中ERK、RSK2 mRNA的表达，采用Western blot和免疫组化法检测移植瘤组织中ERK、RSK2、糖原合成激酶3β(GSK3β)、Bad及其磷酸化水平。
结果模型组、bufalin低剂量组、bufalin中剂量组、bufalin高剂量组、PD98059组和联合用药组的裸鼠肿瘤体积分别为(1.758±0.181)cm3、(1.680±0.150)cm3、(1.285±0.134)cm3、(0.873±0.095)cm3、(0.815±0.108)cm3和(0.530±0.104)cm3。HE染色显示，各组移植瘤组织均有不同程度的坏死，以联合用药组最为明显。TUNEL法显示，模型组、bufalin低剂量组、bufalin中剂量组、bufalin高剂量组、PD98059组和联合用药组的凋亡指数分别为(6.0±0.6)%、(11.0±0.7)%、(19.1±0.9)%、(25.1±1.4)%、(20.0±1.2)%和(17.1±0.7)%，以bufalin高剂量组凋亡指数最高。实时定量PCR检测显示，模型组、bufalin低剂量组、bufalin中剂量组、bufalin高剂量组、PD98059组和联合用药组的ERK mRNA的ΔCt值分别为0.270±0.084、0.293±0.081、0.596±0.224、0.857±0.183、0.868±0.187和1.313±0.282；RSK2 mRNA的ΔCt值分别为0.340±0.062、0.337±0.071、0.642±0.226、0.915±0.170、0.923±0.176和1.413±0.269，ERK和RSK2 mRNA表达均呈降低趋势。Western blot和免疫组化检测显示，各组ERK、RSK2、Bad蛋白水平的差异均无统计学意义(均P>0.05)；模型组、bufalin低剂量组、bufalin中剂量组、bufalin高剂量组、PD98059组和联合用药组的p-ERK蛋白相对表达量分别为0.721±0.094、0.695±0.095、0.555±0.080、0.388±0.052、0.341±0.060和0.235±0.056，免疫反应评分中位数分别为8、8、6、4、5和3分。模型组、bufalin低剂量组、bufalin中剂量组、bufalin高剂量组、PD98059组和联合用药组的p-RSK2蛋白相对表达量分别为0.613±0.085、0.612±0.084、0.427±0.089、0.305±0.056、0.258±0.051和0.158±0.058，免疫反应评分中位数分别为8、8、5、3、3和1分。模型组、bufalin低剂量组、bufalin中剂量组、bufalin高剂量组、PD98059组和联合用药组的GSK3β蛋白相对表达量逐渐升高，p-GSK3β和p-Bad蛋白相对表达量均呈降低趋势，bufalin中剂量组、bufalin高剂量组、PD98059组和联合用药组与模型组比较，差异均有统计学意义(均P<0.05)。
结论bufalin对裸鼠食管癌移植瘤有明显的抑制作用。bufalin可通过抑制ERK、RSK2的磷酸化水平抑制移植瘤的生长，通过抑制GSK3β的失活而抑制肿瘤的增殖，通过下调p-Bad的表达而发挥促凋亡作用。