【摘 要】
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供体细胞的不完全重编程是动物克隆效率低的主要原因。本研究采用不同浓度(0.00（对照）、0.25、0.50和1.00μmol·L-1)的DNA甲基化转移酶抑制剂5-氮杂-2’-脱氧胞苷（5-Aza-2’-de
【机 构】
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广西大学亚热带农业生物资源保护与利用国家重点实验室; 广西壮族自治区畜牧研究所;
【基金项目】
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国家转基因重大专项(2011ZX08007-003);国家自然科学基金(31160457);桂科基金(2010GXNSFA013097)
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供体细胞的不完全重编程是动物克隆效率低的主要原因。本研究采用不同浓度(0.00（对照）、0.25、0.50和1.00μmol·L-1)的DNA甲基化转移酶抑制剂5-氮杂-2’-脱氧胞苷（5-Aza-2’-deoxycytidine,5-Aza-CdR）处理德保猪耳成纤维细胞,将处理后成纤维细胞作供体进行手工克隆。结果显示:各处理组细胞生长曲线均呈"S"型,其中0.25μmol·L-1组细胞生长曲线与对照组最相近。随着5-Aza-CdR浓度增加,细胞均有不同程度的畸变、生长抑制甚至致死。0.000.50μmol·L-15-Aza-CdR处理对德保猪成纤维细胞不会显著改变其细胞染色体整倍性。5-Aza-CdR不同程度下调了德保猪耳成纤维细胞中Dnmtl、Tet1、Tet2和Tet3的相对表达,对Dnmt1、Tet1和Tet3表达量的下调呈剂量相关。以处理后成纤维细胞作供体,猪手工克隆重构胚体外发育的卵裂率（24、48 h）和桑椹胚率各组间差异不显著（P>0.05）,其中0.25μmol·L-1组和0.50μmol·L-1组囊胚发育率显著高于1.00μmol·L-1组（P<0.05）,而与对照组差异不显著（P>0.05）。0.50μmol·L-1组囊胚细胞数显著高于对照组和1.00μmol·L-1组（P<0.05）,而与0.25μmol·L-1组之间差异不显著（P>0.05）。综上表明:高浓度5-Aza-CdR对德保猪成纤维细胞增殖和染色体具有副作用,低浓度(≤0.25μmol·L-1)的5-Aza-CdR可用于供体处理以降低克隆胚胎甲基化水平及提高手工克隆猪胚胎发育潜能。
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