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摘要 本试验利用PWAX混合型弱阴离子交换柱吸附食品中的合成着色剂，采用氨化甲醇溶液洗脱，结合平行浓缩仪，测定食品中的合成着色剂。与《食品中合成着色剂的测定》（GB/T 5009.35—2016）相比，该测定方法浓缩时间短、回收率高、重复性好、稳定性好，适用于大批量样品的同时检测。
关键词 固相萃取；弱阴离子交换柱；平行浓缩仪；食品；合成色素
中图分类号 O657.7 文献标识码 A 文章编号 1007-5739（2018）03-0252-02
Abstract The cleanert PWAX was used to absorb the synthetic colorants in food in this study.The mixture was eluted with ammonium methanol，and the synthetic colorants in food were determined combined with parallel concentrator.Compared with "Determination of synthetic colorants in foods" （GB/T 5009.35—2016），this determination method was suitable for its short concentration time，high recovery rate，excellent stability and reproducib-ility，for simultaneous testing of large quantiti es of samples.
Key words solid phase extraction；cleanert PWAX；parallel concentrator；food；synthetic colorant
为满足消费者对食品的感官需求，食品着色剂在食品加工工艺中有着广泛的应用，食品安全国家标准对允许添加的合成着色剂种类及限量有明确的规定。目前，已有多种食品中色素的检测方法标准，《食品中合成着色剂的测定》（GB/T 5009.35—2016）中采用聚酰胺粉吸附食品中的合成着色剂，并用乙醇胺溶液进行洗脱。聚酰胺对合成色素的吸附能力受温度的影响，试验时需要对样品和淋洗液进行加热处理，而加入聚酰胺粉的样品抽滤及乙醇胺浓缩所需时间均较长，不适合于大批量样品同时处理。《食品中诱惑红的测定》（GB 5009.141—2016）中采用层析纸色谱法检测食品中的色素，样品前处理较复杂，而且结果的准确性和稳定性均较差，《食品中诱惑红、酸性红、亮蓝、日落黄的含量检测》（SN/T 1743—2006）中也是采用聚酰胺吸附法提取，同样不适合于大批量样品的处理。
常见的合成着色剂大多具有苯磺本钠结构，选用PWAX混合弱阴离子交换柱可以吸附食品中合成着色剂，再利用氨化甲醇溶液洗脱，用平行浓缩仪浓缩，可大大缩短样品前处理时间，适用于大批量样品的同时检测。该方法可以同时检测柠檬黄、新红、苋菜红、胭脂红、日落黄、诱惑红、亮蓝、酸性红8种合成色素[1-2]。
1 材料与方法
1.1 试剂与仪器
试验试剂包括0.02 mol/L乙酸铵溶液（称取乙酸铵1.54 g，加水至1 000 mL，经0.45 μm微孔滤膜过滤）、甲醇-甲酸溶液（量取甲醇60 mL、甲酸40 mL，混匀）、柠檬酸溶液（称取柠檬酸20 g，加水至100 mL溶解，混匀）、pH=6.0的水（水加柠檬酸溶液调节pH值为6.0）、pH=4.0的水（水加柠檬酸溶液，调节pH值为4.0）、2%氨化甲醇溶液（量取甲醇980 mL、氨水溶液20 mL，混匀）、92 g/L亚铁氰化钾溶液（称取亚铁氰化钾106 g，加入适量水溶解，用水定容至1 000 mL）、183 g/L乙酸锌溶液（称取乙酸锌220 g溶于少量水中，加入冰乙酸30 mL，用水定容至1 000 mL）。所用试剂均为色谱纯或优级纯。
仪器包括SPE小柱（Cleanert PWAX混合型弱阴离子交换柱，150 mg/6 mL）、正压固相萃取仪（JPPM-0160-3.0）、自动平行浓缩仪（BUCHI multivapor P-12）。
1.2 试样提取
1.2.1 碳酸饮料、果汁饮料、果汁、果酒、配制酒类。称取样品10 g于100 mL烧杯中，加热去除二氧化碳或乙醇。
1.2.2 肉制品、油脂、巧克力、含油调味料、油炸食品等高油脂试样。称取已均质样品10 g于50 mL离心管中，加入20 mL石油醚，涡旋2 min，离心，弃去石油醚层，残渣吹干，加入5 mL 1%氨水溶液提取，重复提取至提取液为无色。合并上清液置于100 ℃水浴中浓缩至2 mL左右，水洗转移至10 mL比色管中，用水定容。若试样pH值偏高，用柠檬酸水溶液调节pH值至6左右[3-4]。
1.3 试液萃取净化
依次用6 mL甲醇、6 mL水活化SPE小柱。加入试样溶液10 mL，再依次用6 mL水（pH=4）、用6 mL甲醇-甲酸溶液、6 mL水（pH=6）淋洗。通入氮气吹干小柱2 min，6 mL 2%氨化甲醇溶液洗脱，收集洗脱液于平行浓缩仪小管中，浓缩至近干，用1 mL水定容，过0.45 μm水相过滤膜，待测。需注意的是若提取液呈碱性，在过柱前要将其pH值调至6左右，保证小柱对合成色素有更好的吸附；SPE小柱在净化洗脱过程中应控制流速在1 mL/min左右[5-6]。
1.4 试验条件
利用C18色谱柱（5 μm，4.6 mm×250 mm），流速为1.0 mL/min，进样量为10 μL，波长為254 nm，温度为35 ℃，采用流动相梯度淋洗，具体过程见表1。 2 结果与分析
色素标准液浓度与峰面积的关系如表2所示，柠檬黄、新红、苋菜红、胭脂红、日落黄、诱惑红、亮蓝、酸性红、赤藓红标准液浓度与峰面积的相关系数分别为0.999 7、0.999 4、0.999 5、1.000 0、1.000 0、0.999 9、0.998 9、1.000 0、0.999 9，具有良好的线性关系。色素标准溶液及果汁样品色谱图如图1～2所示，果汁中色素加标回收率为89.5%～98.5%（表3）。
《食品安全国家标准 食品中合成着色剂的测定》（GB 5009.35—2016）中赤藓红采用的是液-液萃取的方法，而赤藓红为苯甲酸钠结构，在SPE小柱上保留较弱，在淋洗阶段将淋洗液改为6 mL水（pH=6）、6 mL甲醇，其他条件不变，采用PWAX混合型弱陰离子交换柱（150 mg/6 mL）可用于赤藓红的检测。赤藓红标准溶液以及火腿肠样品色谱图如图3～4所示，火腿肠加标回收率为90.5%～91.3%（表4）。
3 结论
试验结果表明，采用PWAX混合型弱阴离子交换柱（150 mg/6 mL）固相萃取，结合平行浓缩仪，可以同时、快速、准确地检测食品中8种合成着色剂。在淋洗阶段改进后，还可以同时检测食品中赤藓红的含量，该方法适用于大批量检测食品中的合成着色剂。
4 参考文献
[1] 刘慧慧，宫向红，徐英江，等.固相萃取-高效液相色谱法同时测定海米中10种合成色素[J].食品科学，2014，35（4）：170-173.
[2] 蒋荣华，吴玉杰，温和心，等.肉制品中6种人工合成色素快速测定方法[J].食品工业科技，2017，38（24）：278-281.
[3] 葛宇.食品中人工合成色素使用法规及检测标准进展[J].质量与标准化，2011（9）：31-35.
[4] 宋丹萍，张宏，李琪.国内外食用色素标准的比较及检测方法的研究进展[J].食品科学，2014，35（3）：295-300.
[5] 李林，武术兰，王震.食品中合成着色剂的测定方法研究：高效液相色谱法[J].现代农业科技，2017（17）：253-254.
[6] 李晓芹，徐振东.固相萃取-高效液相色谱法在食品中合成着色剂检测中的应用[J].食品工业，2014（6）：56-58.
关键词 固相萃取；弱阴离子交换柱；平行浓缩仪；食品；合成色素
中图分类号 O657.7 文献标识码 A 文章编号 1007-5739（2018）03-0252-02
Abstract The cleanert PWAX was used to absorb the synthetic colorants in food in this study.The mixture was eluted with ammonium methanol，and the synthetic colorants in food were determined combined with parallel concentrator.Compared with "Determination of synthetic colorants in foods" （GB/T 5009.35—2016），this determination method was suitable for its short concentration time，high recovery rate，excellent stability and reproducib-ility，for simultaneous testing of large quantiti es of samples.
Key words solid phase extraction；cleanert PWAX；parallel concentrator；food；synthetic colorant
为满足消费者对食品的感官需求，食品着色剂在食品加工工艺中有着广泛的应用，食品安全国家标准对允许添加的合成着色剂种类及限量有明确的规定。目前，已有多种食品中色素的检测方法标准，《食品中合成着色剂的测定》（GB/T 5009.35—2016）中采用聚酰胺粉吸附食品中的合成着色剂，并用乙醇胺溶液进行洗脱。聚酰胺对合成色素的吸附能力受温度的影响，试验时需要对样品和淋洗液进行加热处理，而加入聚酰胺粉的样品抽滤及乙醇胺浓缩所需时间均较长，不适合于大批量样品同时处理。《食品中诱惑红的测定》（GB 5009.141—2016）中采用层析纸色谱法检测食品中的色素，样品前处理较复杂，而且结果的准确性和稳定性均较差，《食品中诱惑红、酸性红、亮蓝、日落黄的含量检测》（SN/T 1743—2006）中也是采用聚酰胺吸附法提取，同样不适合于大批量样品的处理。
常见的合成着色剂大多具有苯磺本钠结构，选用PWAX混合弱阴离子交换柱可以吸附食品中合成着色剂，再利用氨化甲醇溶液洗脱，用平行浓缩仪浓缩，可大大缩短样品前处理时间，适用于大批量样品的同时检测。该方法可以同时检测柠檬黄、新红、苋菜红、胭脂红、日落黄、诱惑红、亮蓝、酸性红8种合成色素[1-2]。
1 材料与方法
1.1 试剂与仪器
试验试剂包括0.02 mol/L乙酸铵溶液（称取乙酸铵1.54 g，加水至1 000 mL，经0.45 μm微孔滤膜过滤）、甲醇-甲酸溶液（量取甲醇60 mL、甲酸40 mL，混匀）、柠檬酸溶液（称取柠檬酸20 g，加水至100 mL溶解，混匀）、pH=6.0的水（水加柠檬酸溶液调节pH值为6.0）、pH=4.0的水（水加柠檬酸溶液，调节pH值为4.0）、2%氨化甲醇溶液（量取甲醇980 mL、氨水溶液20 mL，混匀）、92 g/L亚铁氰化钾溶液（称取亚铁氰化钾106 g，加入适量水溶解，用水定容至1 000 mL）、183 g/L乙酸锌溶液（称取乙酸锌220 g溶于少量水中，加入冰乙酸30 mL，用水定容至1 000 mL）。所用试剂均为色谱纯或优级纯。
仪器包括SPE小柱（Cleanert PWAX混合型弱阴离子交换柱，150 mg/6 mL）、正压固相萃取仪（JPPM-0160-3.0）、自动平行浓缩仪（BUCHI multivapor P-12）。
1.2 试样提取
1.2.1 碳酸饮料、果汁饮料、果汁、果酒、配制酒类。称取样品10 g于100 mL烧杯中，加热去除二氧化碳或乙醇。
1.2.2 肉制品、油脂、巧克力、含油调味料、油炸食品等高油脂试样。称取已均质样品10 g于50 mL离心管中，加入20 mL石油醚，涡旋2 min，离心，弃去石油醚层，残渣吹干，加入5 mL 1%氨水溶液提取，重复提取至提取液为无色。合并上清液置于100 ℃水浴中浓缩至2 mL左右，水洗转移至10 mL比色管中，用水定容。若试样pH值偏高，用柠檬酸水溶液调节pH值至6左右[3-4]。
1.3 试液萃取净化
依次用6 mL甲醇、6 mL水活化SPE小柱。加入试样溶液10 mL，再依次用6 mL水（pH=4）、用6 mL甲醇-甲酸溶液、6 mL水（pH=6）淋洗。通入氮气吹干小柱2 min，6 mL 2%氨化甲醇溶液洗脱，收集洗脱液于平行浓缩仪小管中，浓缩至近干，用1 mL水定容，过0.45 μm水相过滤膜，待测。需注意的是若提取液呈碱性，在过柱前要将其pH值调至6左右，保证小柱对合成色素有更好的吸附；SPE小柱在净化洗脱过程中应控制流速在1 mL/min左右[5-6]。
1.4 试验条件
利用C18色谱柱（5 μm，4.6 mm×250 mm），流速为1.0 mL/min，进样量为10 μL，波长為254 nm，温度为35 ℃，采用流动相梯度淋洗，具体过程见表1。 2 结果与分析
色素标准液浓度与峰面积的关系如表2所示，柠檬黄、新红、苋菜红、胭脂红、日落黄、诱惑红、亮蓝、酸性红、赤藓红标准液浓度与峰面积的相关系数分别为0.999 7、0.999 4、0.999 5、1.000 0、1.000 0、0.999 9、0.998 9、1.000 0、0.999 9，具有良好的线性关系。色素标准溶液及果汁样品色谱图如图1～2所示，果汁中色素加标回收率为89.5%～98.5%（表3）。
《食品安全国家标准 食品中合成着色剂的测定》（GB 5009.35—2016）中赤藓红采用的是液-液萃取的方法，而赤藓红为苯甲酸钠结构，在SPE小柱上保留较弱，在淋洗阶段将淋洗液改为6 mL水（pH=6）、6 mL甲醇，其他条件不变，采用PWAX混合型弱陰离子交换柱（150 mg/6 mL）可用于赤藓红的检测。赤藓红标准溶液以及火腿肠样品色谱图如图3～4所示，火腿肠加标回收率为90.5%～91.3%（表4）。
3 结论
试验结果表明，采用PWAX混合型弱阴离子交换柱（150 mg/6 mL）固相萃取，结合平行浓缩仪，可以同时、快速、准确地检测食品中8种合成着色剂。在淋洗阶段改进后，还可以同时检测食品中赤藓红的含量，该方法适用于大批量检测食品中的合成着色剂。
4 参考文献
[1] 刘慧慧，宫向红，徐英江，等.固相萃取-高效液相色谱法同时测定海米中10种合成色素[J].食品科学，2014，35（4）：170-173.
[2] 蒋荣华，吴玉杰，温和心，等.肉制品中6种人工合成色素快速测定方法[J].食品工业科技，2017，38（24）：278-281.
[3] 葛宇.食品中人工合成色素使用法规及检测标准进展[J].质量与标准化，2011（9）：31-35.
[4] 宋丹萍，张宏，李琪.国内外食用色素标准的比较及检测方法的研究进展[J].食品科学，2014，35（3）：295-300.
[5] 李林，武术兰，王震.食品中合成着色剂的测定方法研究：高效液相色谱法[J].现代农业科技，2017（17）：253-254.
[6] 李晓芹，徐振东.固相萃取-高效液相色谱法在食品中合成着色剂检测中的应用[J].食品工业，2014（6）：56-58.