【摘 要】
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目的:采用逆转录病毒载体系统构建荧光标记的K562细胞模型。方法:将增强绿色荧光蛋白(EGFP)cDNA插入载体pCMV-hyg,构建重组质粒pCMV-EGFP-hyg,并与逆转录病毒载体质粒pCMV-G
【机 构】
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南京医科大学第一附属医院输血科,南京医科大学第一附属医院血液科
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目的:采用逆转录病毒载体系统构建荧光标记的K562细胞模型。方法:将增强绿色荧光蛋白(EGFP)cDNA插入载体pCMV-hyg,构建重组质粒pCMV-EGFP-hyg,并与逆转录病毒载体质粒pCMV-G和pCMV-GP共转染293T细胞生产重组逆转录病毒,感染K562细胞;通过Hyg筛选建立EGFP自身标记的K562细胞模型。应用流式细胞仪及荧光显微镜观察绿色荧光蛋白表达。比较EGFP-K562细胞与K562细胞生长曲线。通过外周血淋巴细胞的NK活性试验观察EGFP-K562能否用于有关实验研究。结果:应用EGFPcDNA成功构建pCMV-EGFP-hyg,与逆转录病毒载体系统质粒共转染293T细胞后产生含EGFP的重组逆转录病毒,48h收集的病毒滴度达1.5×106CFU/ml。重组逆转录病毒感染K562细胞后,经Hyg筛选,98%以上稳定表达EGFP。长期培养20代,EGFP表达稳定,对K562细胞生长无影响。以EGFP-K562为靶细胞的NK活性试验显示40∶1效靶比,孵育4h最敏感。结论:应用逆转录病毒载体系统成功构建稳定表达绿色荧光蛋白的EGFP-K562细胞模型,NK活性试验提示EGFP-K562可用作实验研究的新型靶细胞模型。
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