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目的
探讨IL-6生物效应与胞内磷酸化蛋白和转录激活子活性变化之间的关系。
方法应用原位杂交和APAAP方法检测细胞内IL-6R mRNA和蛋白的表达;采用DNA结合蛋白凝胶阻滞电泳分析IL-6信号转导与APRF活性的相关性;用免疫沉淀和SDS-PAGE观察IL-6信号转导中磷酸化蛋白的变化情况。
结果(1)IL-6受体(IL-6R)mRNA和蛋白表达阳性的人骨髓瘤细胞系(SKO-007)体外对IL-6有增殖反应;(2)胞内转录激活子活性与IL-6诱导时间和剂量有相关性,抗gp130单克隆抗体和酪氨酸蛋白激酶抑制剂均可特异性抑制转录激活子活性;(3)IL-6诱导SKO-007细胞后,胞浆内出现一组相对分子质量为(130、90、54、36)×103磷酸化蛋白,它们的磷酸化活性与转录激活子活性一样,也具有时间和剂量相关性。
结论结果提示,转录激活子和这组相对分子质量不同的酪氨酸磷酸化蛋白参与IL-6信号转导调节。