【摘 要】
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目的观察自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤(3-MA)对乙醇诱导的肝星状细胞(HSC)活化作用,并探讨其作用机制。方法体外培养大鼠肝星状细胞株HSC-T6,设立空白对照组、阳性对照组(乙醇刺激
【机 构】
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南昌大学第四附属医院重症医学科,南昌大学第二附属医院消化科、江西省分子医学重点实验室
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目的观察自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤(3-MA)对乙醇诱导的肝星状细胞(HSC)活化作用,并探讨其作用机制。方法体外培养大鼠肝星状细胞株HSC-T6,设立空白对照组、阳性对照组(乙醇刺激组)、低剂量组(5mmol/L 3-MA+100 mmol/L乙醇)、高剂量组(10 mmol/L 3-MA+100 mmol/L乙醇)。RT-PCR分析各组HSC活化标志蛋白α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)及Ⅰ型胶原基因表达,Western blot法检测各组HSC中自噬水平标志蛋白LC3Ⅱ、α-SMA、Ⅰ型胶原表达;MTT法检测3-MA对乙醇诱导的HSC增殖的影响。结果与空白对照组比较,阳性对照组中α-SMA、Ⅰ型胶原mRNA和蛋白表达及LC3Ⅱ表达量明显增加(P<0.05),高剂量组却显著减少(P<0.01);与阳性对照组比较,低剂量组和高剂量组中α-SMA、Ⅰ型胶原mRNA和蛋白表达及LC3Ⅱ表达量逐渐减少(P<0.05);与低剂量组比较,高剂量组中α-SMA、Ⅰ型胶原mRNA和蛋白表达及LC3Ⅱ表达减少(P<0.05)。与阳性对照组比较,加入3-MA处理后的HSC增殖显著减少(P<0.05)。结论 3-MA可抑制乙醇诱导的HSC-T6细胞中LC3Ⅱ蛋白的表达、α-SMA、Ⅰ型胶原mRNA及蛋白的表达,抑制HSC增殖,且高剂量的作用更明显。
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