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摘 要：本实验对头孢氨苄络合回收工艺进行研究。检测方法：采用Ultimate LP-C18（250 mm×4.6 mm，5μm），0.02mol/L磷酸二氢钠（用磷酸调pH值至3.0）-乙腈-甲醇（80∶10∶10），检测波长为260nm，流速为1.0ml/min，柱温为30℃。该工艺路线操作简便，纯度高，适合于工业化生产。
关键词：头孢氨苄；回收；研究
头孢氨苄（Cefalexin），其化学名为（6R，7R）-3-甲基-7-[（R）-2-苯乙酰氨基]-8-氧代-5-硫杂-1-氮杂双环[4，2，0]辛-2-烯-2-甲酸一水化合物，能抑制细胞壁的合成，使细胞内容物膨胀至破裂溶解，杀死细菌。头孢氨苄为广谱抗菌素类药，主用于革兰氏阳性菌和阴性菌感染，如：流行性感冒，出血性败血症、坏死杆菌病、慢性萎缩性喉炎、急性呼吸道感染、小儿化脓性脑膜炎、无神嗜睡、行走拐跛、耳部变蓝等。本文对头孢氨苄合成工艺进行研究。
1 实验材料
1.1 仪器：FA2004电子分析天平（上海衡平仪器仪表厂）；QT-EXP0智能自动液相色谱分离层析仪（上海琪特分析仪器有限公司）；FT-IR 66OO傅里叶变换红外光谱仪（苏州TianRay仪器股份有限公司）；AB/5AB全自动实验室试验容器清洗机（上海邦安检测工程有限公司）；F12-ED 标准型加热制冷循环器（优莱博技术（北京）有限公司）；watersZQ2000 atersZQ2000单四极杆质谱仪（北京雷泰仪器有限公司）；HJ-6A型数显恒温多头磁力搅拌器（上海左乐仪器有限公司）；ZDJ-2D多功能全自动滴定仪（北京先驱威锋技术开发公司）；DOA-P504-BN隔膜式真空泵（北京成萌伟业科技有限公司）；RE-85Z旋转蒸发仪（上海五相仪器仪表有限公司）；PHS-25台式酸度计（常州杰博森仪器有限公司）；BTT小型阵列式紫外可见分光光度计（必达泰克光电科技（上海）有限公司）；1810-C石英自动三重纯水蒸馏器（常州市金坛友联仪器研究所）；Cascada IX 实验室超纯水系统（颇尔过滤器（北京）有限公司）。
1.2 色谱柱：Ultimate LP-C18（250 mm×4.6 mm，5μm）。
1.3 试药：乙醇（济南云翔化工有限公司）、三乙胺（上海金锦乐实业有限公司）、磷酸二氢钠（南通润丰石油化工有限公司）、乙腈（南通润丰石油化工有限公司）、甲醇（南通润丰石油化工有限公司）、磷酸（南通润丰石油化工有限公司）。
1.4 色谱条件
1.4.1 流动相的选择
根据参考文献，分别考察0.02mol/L磷酸二氢钠（用磷酸调pH值至3.0）-乙腈-甲醇（80∶10∶10）， 甲基叔丁基醚-异丙醇-二乙胺（60∶40∶0.1），0.02mol/L磷酸二氢钠（用磷酸调pH值至3.0）-乙腈-甲醇（70∶20∶10）， 不同比例的流动相，结果以0.02mol/L磷酸二氢钠（用磷酸调pH值至3.0）-乙腈-甲醇（80∶10∶10）为流动相，供试品各峰分离效果最好，故选用0.02mol/L磷酸二氢钠（用磷酸调pH值至3.0）-乙腈-甲醇（80∶10∶10）为流动相[1-5]。色谱柱为Ultimate LP-C18（250 mm×4.6 mm，5μm）；0.02mol/L磷酸二氢钠（用磷酸调pH值至3.0）-乙腈-甲醇（80∶10∶10）为流动相；检测波长为260nm；流速1.0mL·min-1；柱温：30℃。理论板数按头孢氨苄峰计算应不得低于2000。
1.4.2 标准曲线的制备
将浓度为60μg·mL-1的对照品溶液分别稀释为1、2、3、4、5、6倍，分别精密吸取10μL注入HPLC，记录色谱图。以峰面积积分值A（μg）为横坐标，进样量为纵坐标，绘制标准曲线，计算回归方程。试验表明，头孢氨苄在60～10μg·mL-1范围内线性关系良好。
2 方法
2.1 工艺设计
在磁力搅拌下向头孢氨苄结晶母液加入络合剂，分别考察温度、PH值对反应的影响。
2.2 头孢氨苄的络合温度的优化
分别采用15摄氏度、17摄氏度、19摄氏度、21摄氏度进行试验。采用15摄氏度试验头孢氨苄络合率为90.2%，采用17摄氏度试验头孢氨苄络合率为91.6%，采用19摄氏度试验头孢氨苄收率为96.2%，采用21摄氏度试验头孢氨苄络合率为95.3%，试验结果表明采用19摄氏度时头孢氨苄络合率最高，所以将试验温度设为19摄氏度。
2.2 头孢氨苄的络合反应PH值的优化
在实验温度为19摄氏度下，分别采用PH值为4.5、4.6、4.7、4.8进行试验。采用PH值为4.5进行试验头孢氨苄络合率为91.2%，采用PH值为4.6进行头孢氨苄络合率为95.9%，采用PH值为4.7进行试验头孢氨苄络合率为96.3%，采用PH值为4.8进行试验头孢氨苄络合率为93.5%。试验结果表明PH值为4.7时头孢氨苄络合率最高。
3 结果与討论
本实验对头孢氨苄络合回收工艺进行优化，得到高纯度产品，提高了产品的回收率。
参考文献
[1]HPLC法测定复方头孢氨苄片中头孢氨苄及甲氧苄啶的含量[J].王建宁，史宏伟，齐力，李凯. 西北药学杂志.2004（02）.
[2]固相萃取-超高效液相色谱串联质谱法测定牛奶中6种头孢菌素类抗生素[J].王建凤，刘艳，杨一帆，贾丽，黄华，杜振霞，范筱京，张经华.食品安全质量检测学报.2015（09）.
[3]动物性食品中头孢氨苄残留检测研究进展[J].张伟，王兴，刘金萍，秦海艳，刘若璇，蔡云虹，汝晓飞，王捍东.安徽农业科学.2016（19）.
[4]The use of a monolithic column to improve the simultaneous determination of four cephalosporin antibiotics in pharmaceuticals and body fluids by HPLC after solid phase extraction-a comparison with a conventional reversed-phase silica-based column[J] . V.F. Samanidou，A.S. Ioannou，I.N. Papadoyannis. Journal of Chromatography B.2004 （1）.
[5]Rapid and sensitive high-performance liquid chromatographic determination of four cephalosporin antibiotics in pharmaceuticals and body fluids[J] . V.F Samanidou，E.A Hapeshi，I.N Papadoyannis. Journal of Chromatography B.2003 （1）.
关键词：头孢氨苄；回收；研究
头孢氨苄（Cefalexin），其化学名为（6R，7R）-3-甲基-7-[（R）-2-苯乙酰氨基]-8-氧代-5-硫杂-1-氮杂双环[4，2，0]辛-2-烯-2-甲酸一水化合物，能抑制细胞壁的合成，使细胞内容物膨胀至破裂溶解，杀死细菌。头孢氨苄为广谱抗菌素类药，主用于革兰氏阳性菌和阴性菌感染，如：流行性感冒，出血性败血症、坏死杆菌病、慢性萎缩性喉炎、急性呼吸道感染、小儿化脓性脑膜炎、无神嗜睡、行走拐跛、耳部变蓝等。本文对头孢氨苄合成工艺进行研究。
1 实验材料
1.1 仪器：FA2004电子分析天平（上海衡平仪器仪表厂）；QT-EXP0智能自动液相色谱分离层析仪（上海琪特分析仪器有限公司）；FT-IR 66OO傅里叶变换红外光谱仪（苏州TianRay仪器股份有限公司）；AB/5AB全自动实验室试验容器清洗机（上海邦安检测工程有限公司）；F12-ED 标准型加热制冷循环器（优莱博技术（北京）有限公司）；watersZQ2000 atersZQ2000单四极杆质谱仪（北京雷泰仪器有限公司）；HJ-6A型数显恒温多头磁力搅拌器（上海左乐仪器有限公司）；ZDJ-2D多功能全自动滴定仪（北京先驱威锋技术开发公司）；DOA-P504-BN隔膜式真空泵（北京成萌伟业科技有限公司）；RE-85Z旋转蒸发仪（上海五相仪器仪表有限公司）；PHS-25台式酸度计（常州杰博森仪器有限公司）；BTT小型阵列式紫外可见分光光度计（必达泰克光电科技（上海）有限公司）；1810-C石英自动三重纯水蒸馏器（常州市金坛友联仪器研究所）；Cascada IX 实验室超纯水系统（颇尔过滤器（北京）有限公司）。
1.2 色谱柱：Ultimate LP-C18（250 mm×4.6 mm，5μm）。
1.3 试药：乙醇（济南云翔化工有限公司）、三乙胺（上海金锦乐实业有限公司）、磷酸二氢钠（南通润丰石油化工有限公司）、乙腈（南通润丰石油化工有限公司）、甲醇（南通润丰石油化工有限公司）、磷酸（南通润丰石油化工有限公司）。
1.4 色谱条件
1.4.1 流动相的选择
根据参考文献，分别考察0.02mol/L磷酸二氢钠（用磷酸调pH值至3.0）-乙腈-甲醇（80∶10∶10）， 甲基叔丁基醚-异丙醇-二乙胺（60∶40∶0.1），0.02mol/L磷酸二氢钠（用磷酸调pH值至3.0）-乙腈-甲醇（70∶20∶10）， 不同比例的流动相，结果以0.02mol/L磷酸二氢钠（用磷酸调pH值至3.0）-乙腈-甲醇（80∶10∶10）为流动相，供试品各峰分离效果最好，故选用0.02mol/L磷酸二氢钠（用磷酸调pH值至3.0）-乙腈-甲醇（80∶10∶10）为流动相[1-5]。色谱柱为Ultimate LP-C18（250 mm×4.6 mm，5μm）；0.02mol/L磷酸二氢钠（用磷酸调pH值至3.0）-乙腈-甲醇（80∶10∶10）为流动相；检测波长为260nm；流速1.0mL·min-1；柱温：30℃。理论板数按头孢氨苄峰计算应不得低于2000。
1.4.2 标准曲线的制备
将浓度为60μg·mL-1的对照品溶液分别稀释为1、2、3、4、5、6倍，分别精密吸取10μL注入HPLC，记录色谱图。以峰面积积分值A（μg）为横坐标，进样量为纵坐标，绘制标准曲线，计算回归方程。试验表明，头孢氨苄在60～10μg·mL-1范围内线性关系良好。
2 方法
2.1 工艺设计
在磁力搅拌下向头孢氨苄结晶母液加入络合剂，分别考察温度、PH值对反应的影响。
2.2 头孢氨苄的络合温度的优化
分别采用15摄氏度、17摄氏度、19摄氏度、21摄氏度进行试验。采用15摄氏度试验头孢氨苄络合率为90.2%，采用17摄氏度试验头孢氨苄络合率为91.6%，采用19摄氏度试验头孢氨苄收率为96.2%，采用21摄氏度试验头孢氨苄络合率为95.3%，试验结果表明采用19摄氏度时头孢氨苄络合率最高，所以将试验温度设为19摄氏度。
2.2 头孢氨苄的络合反应PH值的优化
在实验温度为19摄氏度下，分别采用PH值为4.5、4.6、4.7、4.8进行试验。采用PH值为4.5进行试验头孢氨苄络合率为91.2%，采用PH值为4.6进行头孢氨苄络合率为95.9%，采用PH值为4.7进行试验头孢氨苄络合率为96.3%，采用PH值为4.8进行试验头孢氨苄络合率为93.5%。试验结果表明PH值为4.7时头孢氨苄络合率最高。
3 结果与討论
本实验对头孢氨苄络合回收工艺进行优化，得到高纯度产品，提高了产品的回收率。
参考文献
[1]HPLC法测定复方头孢氨苄片中头孢氨苄及甲氧苄啶的含量[J].王建宁，史宏伟，齐力，李凯. 西北药学杂志.2004（02）.
[2]固相萃取-超高效液相色谱串联质谱法测定牛奶中6种头孢菌素类抗生素[J].王建凤，刘艳，杨一帆，贾丽，黄华，杜振霞，范筱京，张经华.食品安全质量检测学报.2015（09）.
[3]动物性食品中头孢氨苄残留检测研究进展[J].张伟，王兴，刘金萍，秦海艳，刘若璇，蔡云虹，汝晓飞，王捍东.安徽农业科学.2016（19）.
[4]The use of a monolithic column to improve the simultaneous determination of four cephalosporin antibiotics in pharmaceuticals and body fluids by HPLC after solid phase extraction-a comparison with a conventional reversed-phase silica-based column[J] . V.F. Samanidou，A.S. Ioannou，I.N. Papadoyannis. Journal of Chromatography B.2004 （1）.
[5]Rapid and sensitive high-performance liquid chromatographic determination of four cephalosporin antibiotics in pharmaceuticals and body fluids[J] . V.F Samanidou，E.A Hapeshi，I.N Papadoyannis. Journal of Chromatography B.2003 （1）.