【摘 要】
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目的:探讨miR-196b对宫颈癌细胞顺铂耐药性及磷脂酰肌醇-3激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)通路的影响.方法:体外培养人宫颈癌细胞株HeLa、顺铂耐药细胞株HeLa/DDP,检测HeLa、HeLa/DDP对顺铂的耐药性;将HeLa/DDP细胞分为:空白对照(仅用转染试剂处理)+DDP组、阴性对照(转染miR-196b NC)+DDP组、miR-196b inhibitor(转染miR-196b inhibitor)+DDP组,采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测各组细胞miR-196b水
【机 构】
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石家庄医学高等专科学校,石家庄050599;石家庄人民医学高等专科学校,石家庄 050000;河北省卫健委综合监督执法局,石家庄 050071;河北大学附属医院,保定 071000
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目的:探讨miR-196b对宫颈癌细胞顺铂耐药性及磷脂酰肌醇-3激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)通路的影响.方法:体外培养人宫颈癌细胞株HeLa、顺铂耐药细胞株HeLa/DDP,检测HeLa、HeLa/DDP对顺铂的耐药性;将HeLa/DDP细胞分为:空白对照(仅用转染试剂处理)+DDP组、阴性对照(转染miR-196b NC)+DDP组、miR-196b inhibitor(转染miR-196b inhibitor)+DDP组,采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测各组细胞miR-196b水平,蛋白印迹(WB)法检测Akt、磷酸化蛋白激酶B(p-Akt)、PI3K、磷酸化雷帕霉素靶蛋白(p-mTOR)的表达,采用噻唑蓝(MTT)法检测各组细胞的IC50,流式细胞仪检测各组细胞凋亡情况.结果:与HeLa细胞相比,HeLa/DDP细胞miR-196b表达显著升高(P<0.05),随顺铂浓度增加(0.01、0.1、1、5、10、20、40、80、100μmo/l L)HeLa/DDP、HeLa细胞活力下降,经计算HeLa对顺铂的IC50为4.86μmo/l L,HeLa/DDP对顺铂的IC50为68.13μmo/l L,与HeLa相比,HeLa/DDP对顺铂的IC50显著升高(P<0.05);与空白对照+DDP组、阴性对照+DDP组比较,miR-196b inhibitor+DDP组HeLa/DDP细胞中miR-196b表达水平,Akt、p-Akt、PI3K、p-mTOR蛋白水平及顺铂IC50显著下降(P<0.05),细胞凋亡率显著升高(P<0.05).结论:下调miR-196b表达可能通过下调PI3K/Akt通路相关蛋白表达,降低宫颈癌细胞对顺铂的耐药性.
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