【摘 要】
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制备人粒细胞集落刺激因子（G-CSF）与人血清白蛋白（HSA）的融合蛋白。从新鲜人外周血中分离单核细胞，给予大肠杆菌脂多糖刺激后，RT-PCR制备G-CSFcDNA，以其为模板扩增得到人G-CSF的编码
【机 构】
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江南大学生物工程学院生物制药系、工业生物技术教育部重点实验室,无锡第三人民医院中心实验室
【基金项目】
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国家“863”计划项目(2006AA02Z153);上海市科委生物医药重大科技攻关项目(06DZ19020);2006江苏省卫生厅科研项目(Z200611)
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制备人粒细胞集落刺激因子（G-CSF）与人血清白蛋白（HSA）的融合蛋白。从新鲜人外周血中分离单核细胞，给予大肠杆菌脂多糖刺激后，RT-PCR制备G-CSFcDNA，以其为模板扩增得到人G-CSF的编码区序列（525bp）。重叠PCR拼接HSA-GCSF融合基因（2277bp），序列测定正确，中间未加入任何连接肽。插入表达载体pPICgK中α交配因子的开放阅读框内，构建分泌型表达重组质粒pPICgK—HSA-GCSF。电击转化毕赤酵母菌KM71，G418筛选得到高拷贝转化子。甲醇诱导表达融合蛋白，SDS-
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