【摘 要】
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H5N6亚型禽流感是传播性极强的人畜共患病.为了提高H5N6亚型禽流感病毒(AIV)核酸检测结果的准确性,本研究根据其HA、NA基因的序列分别设计合成特异性引物,利用基因克隆和体外
【机 构】
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长春海关技术中心,吉林长春130062;吉林农业大学动物科学技术学院,吉林长春130118
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H5N6亚型禽流感是传播性极强的人畜共患病.为了提高H5N6亚型禽流感病毒(AIV)核酸检测结果的准确性,本研究根据其HA、NA基因的序列分别设计合成特异性引物,利用基因克隆和体外转录技术,分别制备出H5N6亚型AIV检测用HA-cRNA、NA-cRNA核酸标准物质.利用荧光定量PCR检测方法测定均匀性和稳定性,绘制标准扩增曲线和协作标定,计算HA-cCRNA、NA-cRNA的含量(拷贝)及不确定度.结果:H5N6亚型AIV核酸标淮物质的组间和组内精密度无显著差异(P＞0.05),均匀性好;稳定性检验表明,保存在不同温度时间内的标准物质含量无明显变化;本研究制备的H5N6亚型AIV HA、NA基因核酸标准物质最终定值为(4.13±0.18)×109拷贝数/μL和(1.77±0.15)×1010拷贝数/μL.
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