【摘 要】
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目的 探讨miR-124-3p经Wnt通路因子A(Axin1)对骨髓间充质干细胞(BMSCs)的分子靶向机制及调节BMSCs的成骨分化进而参与绝经后骨质疏松(PMOP)的形成.方法 收集20例股骨骨折需要手术并扩髓或暴露髓腔的患者,10例绝经后骨质疏松妇女(PMOP组)和10例非骨质疏松的绝经后妇女(对照组),术中取骨髓组织3～5 mL,建立体外BMSCs细胞模型,用流式细胞仪检测BMSCs标志物,将BMSCs诱导分化为成骨细胞,RT-qPCR法检测miR-124-3p的表达.双荧光素酶报告基因系统检测m
【机 构】
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佛山市三水区人民医院,广东 佛山528100;广东省妇幼保健院,广东 广州510010;广州医科大学附属第二医院,广东 广州510260
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目的 探讨miR-124-3p经Wnt通路因子A(Axin1)对骨髓间充质干细胞(BMSCs)的分子靶向机制及调节BMSCs的成骨分化进而参与绝经后骨质疏松(PMOP)的形成.方法 收集20例股骨骨折需要手术并扩髓或暴露髓腔的患者,10例绝经后骨质疏松妇女(PMOP组)和10例非骨质疏松的绝经后妇女(对照组),术中取骨髓组织3～5 mL,建立体外BMSCs细胞模型,用流式细胞仪检测BMSCs标志物,将BMSCs诱导分化为成骨细胞,RT-qPCR法检测miR-124-3p的表达.双荧光素酶报告基因系统检测miR-124-3p结合位点A-Axin1.构建miR-124-3p过表达载体,miR-124-3p过表达转染PMOP-BMSCs同时更换成骨诱导培养基进行成骨诱导培养.诱导第7、14、21天分别收集细胞进行检测碱性磷酸酯酶染色(ALP)和茜素红染色.成骨诱导第7天,RT-qPCR检测各组BMSCs中Runx2、Osterix靶因子Axin1的表达.Western Blotting检测miR-124-3p转染BMSCs后的表达与Axin1关系.结果 ①RT-qPCR法检测miR-124-3p的表达,PMOP组低于对照组.②miR-124-3p过表达转染、成骨诱导,随着诱导时间的延长,细胞培养液中ALP水平逐渐上升,茜素红染色可见结节沉积逐增加.③RT-qPCR检测成骨诱导第7天,Runx2和Osterix的表达,BMSC+成骨分化液组明显高于BMSC组,BMSC+过表达miR-124-3p组较其对照组明显上升;Axin1的表达,BMSC+成骨分化液组明显低于BMSC组,BMSC+过表达miR-124-3p组较其对照组显降低.④荧光素酶报告基因实验证明了miR-124-3p与Axin1的可结合性.⑤Western Blotting检测BMSCs,miR-124-3p过表达组Axin1表达显著下降,而miR-124-3p抑制组Axin1表达显著升高.结论 miR-124-3p可通过Wnt通路靶点Axin1调节BMSCs的成骨分化进而参与PMOP的形成.
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