【摘 要】
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目的:利用AD-EASY TM 系统,构建高效而又安全的肝细胞生长因子(HGF)基因腺病毒载体(Ad-HGF),以研究HGF基因在心脏内的表达.方法:从人胎肝中抽提总RNA,并以该肝细胞总RNA为模
【机 构】
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华中科技大学协和医院心内科,华中科技大学同济医学院病理学系
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目的:利用AD-EASY TM 系统,构建高效而又安全的肝细胞生长因子(HGF)基因腺病毒载体(Ad-HGF),以研究HGF基因在心脏内的表达.方法:从人胎肝中抽提总RNA,并以该肝细胞总RNA为模版,利用合成的1对引物,采用RT-PCR技术获得HGF基因的cDNA,并引入酶切位点,先转入感受态质粒,再转化大肠杆菌进行扩增,筛选阳性菌落,经酶切及测序,证实目的HGF基因已经转入,再将该基因转入pUC18质粒,pUC18质粒与Ad-EASY质粒进行同源重组,用PacⅠ酶切成线性化DNA,利用脂质胺转染293细胞,经3轮扩増,制备高效表达并用绿色荧光标志Ad-HGF.并将该载体作实验组,与HGF组作比较,观察对VEC的抗凋亡作用.结果:在荧光显微镜发现293细胞发光率为100%,Ad-HGF的HGFcDNA经过测序鉴定与基因库序列一致.结论:Ad-HGF的成功构建,为冠心病转基因治疗的基础与临床研究奠定了基础.
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