探究组织蛋白酶D（CatD）对皮肤成纤维细胞降解吞入胞内的晚期糖基化终末产物（AGE）的调控作用。
方法分别以CatB+CatL、CatD以及20S蛋白酶体的酶活性抑制剂CA074Me、天冬氨酸酶抑制剂（pepstatin A）、MG-132处理皮肤成纤维细胞，CCK8和荧光法检测细胞活性及蛋白酶活性。CA074Me、pepstatin A、MG-132组分别加入AGE-BSA孵育8 h，而对照组加入磷酸盐缓冲液（PBS）。孵育8 h后，置换含相应抑制剂的新鲜培养基继续培养24 h，流式细胞仪检测各时间点胞内AGE-BSA平均荧光强度。以不同浓度pepstatin A（37.5、75、150 μmol/L）或PBS处理皮肤成纤维细胞，加入AGE-BSA孵育，方法同前，ELISA检测各时间点胞内AGE-BSA平均浓度，计算降解率。慢病毒转染皮肤成纤维细胞，设空白对照组、空载病毒转染组、CatD高表达慢病毒转染组，荧光显微镜观察，RT-PCR、Western印迹法和荧光法检测各组CatD mRNA和蛋白表达及酶活性。分别加入AGE-BSA孵育，处理及检测方法同前，计算降解率。
结果1 μmol/L CA074Me组、75 μmol/L pepstatin A组及1 μmol/L MG-132组细胞增殖活性均在90%以上，与对照组（100%）差异无统计学意义（F=1.525，P > 0.05）。去除AGE-BSA 24 h后，CA074Me+AGE-BSA组和MG-132+AGE-BSA组胞内AGE-BSA荧光强度（275.00 ± 10.15、259.00 ± 11.14）均较其相应8 h点荧光强度（295.00 ± 6.56、285.67 ± 8.74）显著下降（配对t值分别为4.778、6.154，均P < 0.05），而pepstatin A+AGE-BSA组8 h和32 h点细胞内AGE-BSA荧光强度差异无统计学意义（均P > 0.05）。37.5、75和150 μmol/L pepstatin A组24 h内对吞入胞内AGE-BSA的降解率分别为9.64% ± 1.27%、5.62% ± 0.47%和3.21% ± 0.73%，各组间差异有统计学意义（F=45.876，P < 0.05），且该降解率随pepstatin A浓度增加而降低（P < 0.05）。荧光显微镜下观察，空白对照组细胞未见荧光，空载病毒转染组和CatD高表达慢病毒转染组细胞荧光阳性率均在80%以上。CatD高表达慢病毒转染组CatD mRNA、蛋白表达及活性均较另2组显著上调（均P < 0.05）。CatD高表达慢病毒转染+AGE-BSA组24 h内AGE-BSA的降解率显著高于AGE-BSA组和空载病毒转染+AGE-BSA组（均P < 0.05）。
结论CatD可促进皮肤成纤维细胞降解吞入胞内的AGE-BSA。