【摘 要】
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目的用悬浮培养昆虫细胞方式表达人乳头瘤病毒16型(HPV16)L1蛋白,为获得病毒样颗粒(VLPs)及进一步深入研究疫苗和诊断试剂盒打基础。方法优化昆虫细胞Sf9的悬浮培养条件;优化
【基金项目】
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黑龙江省青年基金(QC06C062);黑龙江省科技攻关项目(GB02C111);哈尔滨科技攻关项目(2004AA3CS176-1)
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目的用悬浮培养昆虫细胞方式表达人乳头瘤病毒16型(HPV16)L1蛋白,为获得病毒样颗粒(VLPs)及进一步深入研究疫苗和诊断试剂盒打基础。方法优化昆虫细胞Sf9的悬浮培养条件;优化扩增病毒和蛋白的条件;空斑试验测定病毒滴度;SDS-PAGE和Western Blot分析目的蛋白的表达情况;透射电镜观察细胞内HPV16L1蛋白形成的VLPs。结果优化后,悬浮培养昆虫细胞初始接种密度为5×105cell/ml,以MOI(Multiplicity of Infection)=10接种重组病毒rBacV/HPV16 L1,72~84h收获细胞沉淀为最佳。经透射电镜观察,在重组病毒感染的昆虫细胞内,存在HPV16 L1蛋白形成的VLPs。结论优化了细胞悬浮培养、病毒扩增和蛋白表达的条件;电镜观察在重组病毒rBacV/HPV16 L1感染的昆虫细胞中,HPV16 L1蛋白可形成VLPs。
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