【摘 要】
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目的 探讨常规PCR和实时荧光定量PCR(Q-PCR)方法检测蜡样芽胞杆菌群rpoB基因的特异性和敏感性.方法 提取蜡样芽胞杆菌群和其他各种对照细菌的基因组DNA,设计并合成蜡样芽
【机 构】
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第二军医大学微生物学教研室,上海市医学生物防护重点实验室,上海200433
【出 处】
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中国微生物学会第二届全国芽胞杆菌研究与应用学术研讨会
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目的 探讨常规PCR和实时荧光定量PCR(Q-PCR)方法检测蜡样芽胞杆菌群rpoB基因的特异性和敏感性.方法 提取蜡样芽胞杆菌群和其他各种对照细菌的基因组DNA,设计并合成蜡样芽胞杆菌群rpoB基因扩增引物,采用常规PCR和SYBR green实时定量PCR两种方法扩增rpoB基因片段,并将PCR产物克隆到pMD18-T载体后进行DNA测序.结果 常规PCR和Q-PCR均能扩增出蜡样芽胞杆菌群rpoB基因的174bp DNA片段,而各种对照菌株均未见扩增.序列比对发现蜡样芽胞杆菌群细菌在该片段中存在5处核苷酸的不同,差异率为2.88％.以炭疽芽胞杆菌基因组DNA系列稀释作为扩增模板显示常规PCR最小检出量为3.42pg,Q-PCR的敏感性达到171fg,3次重复实验显示Q-PCR检测rpoB基因的灵敏度为(3.32× 101 +7.45× 100)拷贝.结论 以rpoB基因为检测靶基因的Q-PCR方法具有高度的特异性和良好的敏感性,能实现对蜡样芽胞杆菌群的快速而准确的检测.
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