地高辛标记对旱稻进行southern杂交分析主要影响因素的优化和验证

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e以转基因旱稻和野生型旱稻为材料,对通过地高辛随机引物标记法进行的旱稻基因组Southern杂交条件进行了优化分析,包括探针制备效率、DNA样品量、酶切体系及转膜时间等。结果表明:影响探针制备效率的首要因素是温度而不是时间;DNA上样量在10-30 μg均可以获得高质量的杂交图;60 μL体系15 h即可酶切彻底并获得良好的杂交效果;转膜时间6 h即可。本研究所优化的地高辛标记的旱稻杂交分析结果稳定重复性好,具有较高的灵敏度和信噪比。基金项目:国家转基因生物新品种培育科技重大专项(编号:2016ZX080
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