【摘 要】
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本研究旨在建立一种快速、灵敏的用于诊断水泡性口炎的SYBR Green Ⅰ实时荧光定量RT-PCR检测方法.通过RT-PCR分别扩增印第安纳型水泡性口炎病毒(VSV-IN)和新泽西型水泡性口炎病毒(VSV-NJ)的G基因,然后将其连接到克隆载体pMD19-T上,构建质粒标准品pMD-VSV-IN-G和pMD-VSV-NJ-G.根据GenBank中VSV-IN和VSV-NJ的G基因保守序列设计引物,利用SYBR Green Ⅰ法进行实时荧光定量RT-PCR,建立标准曲线,并进行特异性、敏感性和重复性试验.结
【机 构】
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中国农业科学院北京畜牧兽医研究所农村农业部兽用药物与诊断技术北京科学观测试验站,北京 100193;中国农业大学动物医学院,北京 100193;广东省科学院动物研究所广东省动物保护与资源利用重点实验室
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本研究旨在建立一种快速、灵敏的用于诊断水泡性口炎的SYBR Green Ⅰ实时荧光定量RT-PCR检测方法.通过RT-PCR分别扩增印第安纳型水泡性口炎病毒(VSV-IN)和新泽西型水泡性口炎病毒(VSV-NJ)的G基因,然后将其连接到克隆载体pMD19-T上,构建质粒标准品pMD-VSV-IN-G和pMD-VSV-NJ-G.根据GenBank中VSV-IN和VSV-NJ的G基因保守序列设计引物,利用SYBR Green Ⅰ法进行实时荧光定量RT-PCR,建立标准曲线,并进行特异性、敏感性和重复性试验.结果,在拷贝数6.82～6.82X108copies/μL范围内,Ct值与质粒拷贝数的对数值呈良好的线性关系,pMD-VSV-IN-G标准曲线的R2值为0.998 12,pMD-VSV-NJ-G标准曲线的R2值为0.997 48;检测其他病毒均无特异性扩增曲线,特异性良好.pMD-VSV-IN-G的检测灵敏度为6.82 copies/μL,pMD-VSV-NJ-G的检测灵敏度也为6.82 copies/μL,是普通RT-PCR方法的10倍.用该方法对实验室保存的VSV-IN和VSV-NJ各5份攻毒小鼠样品进行检测,检测结果与普通RT-PCR检测一致.上述结果表明,本检测方法的建立对快速、灵敏鉴别诊断IN型和NJ型水泡性口炎病毒具有重要的应用价值.
其他文献
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目的:比较胰岛素联合二甲双胍与磺脲类药物联合二甲双胍治疗2型糖尿病(T2DM)患者的临床疗效.方法:将100例T2DM患者随机分为两组各50例,研究组予以胰岛素联合二甲双胍治疗,对照组予以磺脲类药物联合二甲双胍治疗.比较两组治疗前后的空腹血糖(FPG)、餐后2h血糖(2hBG)、糖化血红蛋白(HbA1c)、胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)、胰岛β细胞功能指数(HOMA-β).结果:两组治疗后FBG、2hBG、HbA1c均明显降低(P0.05).两组治疗后HOMA-IR、HOMA-β均明显改善(P<0.05
为明确深绿木霉HB20111和哈茨木霉TW21990共培养发酵对黄瓜枯萎病的防治作用,采用对峙培养法观察两菌株的亲和性,通过浸种抑菌萌发试验筛选共培养发酵的最佳条件,并在温室条件下验证其生防效果.结果表明:在PDA平板上25℃对峙培养5 d,两株木霉亲和性较好.两菌株等量接种发酵培养基,25℃、130 r/min振荡培养72 h,共培养发酵液500倍稀释浸种处理,对黄瓜种子根长的促生效果显著(P<0.05).温室条件下,共培养发酵液500倍稀释液浸种对黄瓜枯萎病的温室防治效果和黄瓜幼苗增重率分别达73.6
采用平板稀释法从海南橡胶园16份根际土壤中分离获得6株拮抗木霉,通过对峙培养、非挥发性和挥发性物质及几丁质酶活测定,从中筛选出一株对橡胶树胶孢炭疽菌Colletotrichum gloeosporioides和多主棒孢菌Corynespora cassiicola均有较好抑制作用的菌株T008;采用分子生物学鉴定方法,结合形态学特征,明确了拮抗菌T008为棘孢木霉Trichoderma asperellum.通过室内防效测定,棘孢木霉T008预防处理对胶孢炭疽菌和多主棒孢菌的抑制率分别达61.02％和58
目的:探讨表柔比星联合多西他赛或紫杉醇治疗乳腺癌的效果差异.方法:选取2018年2月至2019年7月本院收治的86例乳腺癌患者,根据动态随机分组法将其分为对照组(n=43)和观察组(n=43),对照组采用表柔比星联合紫杉醇治疗,观察组采用表柔比星联合多西他赛治疗,比较两组临床缓解率、1年内复发率、生存时间以及不良反应发生率.结果:两组患者临床缓解率差异经统计学软件检验显示无统计学意义(P>0.05);观察组1年内复发率和不良反应发生率低于对照组,生存时间长于对照组,差异经统计学软件检验显示有统计学意义(P
目的:分析、对比内镜下金属钛夹与注射止血治疗急性非静脉曲张性上消化道出血的临床效果.方法:选择2018年7月1日至2020年6月30日康平县人民医院收治的100例急性非静脉曲张性上消化道出血患者为研究对象,依据随机数字表法,随机将其分为对照组和观察组(每组50例).对照组采取内镜下注射止血治疗,观察组则应用内镜下金属钛夹止血治疗.观察、记录两组患者治疗后即时止血情况、有效止血情况、再次出血情况、穿孔情况及康复指标.结果:观察组即时止血率、有效止血率高于对照组,观察组再次出血率、输血总量低于对照组,观察组肠
褐飞虱Nilaparvata lugens(St?l)以单食性水稻为主,是亚洲地区重要的水稻害虫之一,繁殖力强的特点是其大面积为害水稻的重要原因.金龟子绿僵菌Metarhizium anisopliae是一种环境友好型的昆虫病原真菌,近年来被广泛用于害虫防治.本研究结果显示8×1010孢子/mL金龟子绿僵菌悬浮剂在实验室条件和田间条件下对褐飞虱都具有明显的致死效果,最高校正死亡率与相对防效分别为55.67％和63.81％.与对照组相比,感染金龟子绿僵菌雌性褐飞虱16 d内产卵量下降了38.37％,卵孵化率
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