【摘 要】
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目的 构建靶向过氧化物酶体增殖活化受体-γ(PPAR-γ)基因的siRNA载体.方法 根据siRNA设计原则,在PPAR-γ mRNA(AF013266)序列中设计2个特异性靶序列(677-695和497-515);体外合成对应发卡样DNA片段,退火后加A处理,先将其克隆入T载体,再亚克隆人siRNA载体pRNAT-U6.2,对插入序列进行DNA序列分析.结果 发卡样siRNA单链DNA寡核苷酸,
【机 构】
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450052,郑州大学第一附属医院骨科,郑州大学基础医学院微生物免疫学教研室,郑州大学基础医学院生物化学教研室,450052,郑州大学第一附属医院骨科
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目的 构建靶向过氧化物酶体增殖活化受体-γ(PPAR-γ)基因的siRNA载体.方法 根据siRNA设计原则,在PPAR-γ mRNA(AF013266)序列中设计2个特异性靶序列(677-695和497-515);体外合成对应发卡样DNA片段,退火后加A处理,先将其克隆入T载体,再亚克隆人siRNA载体pRNAT-U6.2,对插入序列进行DNA序列分析.结果 发卡样siRNA单链DNA寡核苷酸,退火后,电泳可见明亮靶条带;T7/SP6作为引物进行PCR扩增,筛选得到阳性克隆pGEM-T-SPPAR-γ1和pGEM-T-SPPAR-γ2.PCR扩增鉴定得到阳性亚克隆pRNAT-U6.2-SPPAR-γ1和pRNAT-U6.2-SPPAR-γ2,测序证实插入序列与设计完全一致.结论 成功构建2个PPAR-γ基因靶向性siRNA载体pRNAT-U6.2-SPPAR-γ;为PPAR-γ基因沉默的研究提供实验工具。
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