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【摘要】目的:探讨卡式微柱凝胶法在血型鉴定中的作用。方法:将1800位名病人同时采用卡式微柱凝胶法和传统的手工操作法作血型鉴定。 结果:卡式微柱凝胶法正确率为100%,手工正定型法为98.72%,正定型+反定型为100%。 结论:卡式微柱凝胶法可作为血型鉴定的常规检测方法。
【关键词】微柱凝胶技术;血型鉴定
【中图分类号】R476.5【文献标识码】B【文章编号】1005-0515(2010)009-0012-01
准确的血型鉴定是临床安全、有效输血的重要保证。微柱凝胶检测技术(MGI)是近几年刚传入我国的一种用于输血前检查的方法,是目前国际卫生组织推荐的最先进的微柱凝胶免疫检测技术。本血站自2007年6月~2009年12月对1800名献血者做了卡式法与手工操作的平行实验,并对结果进行了比较,现将比较的结论与相关分析报道于下。
1 材料和方法
1.1 试剂:微柱凝胶卡(抗A、抗B、抗D、A型红细胞、B型红细胞、clt管)、微柱凝胶多克隆抗人球卡、谱细胞、低离子液、离心机、孵育箱均由瑞士达亚美公司提供,手工试剂 :抗A、抗B血清为长春生物制品研究所生产。单克隆抗D为台湾贝索公司生产。
1.2 仪器:孵育器:Diamed-ID(达亚美) ID-Incubator 37SⅠ专用孵育器。离心机:Diamed-ID(达亚美) ID-Centrifuge 12SⅡ专用离心机。
1.3 检测方法。
1.3.1 卡式检测法:按达亚美公司卡氏血型鉴定手册进行。取Diamed-ID ABO/Rh 血型鉴定卡一个,标记病人的姓名 病历号等,撕去卡上的锡纸膜。配制 5%的红细胞悬液(25ul病人RBC+0.5ml Diluent2低离子缓冲液)在A.B.D孔分别加入10ul抗A抗B抗D,标准血清。在A.B.D孔分别加入已配制的2%病人红细胞悬液10ul,37℃孵育15分钟,离心,按说明书提示标准判读结果。
1.3.2 手工操作:试管法检测ABO、RhD 血型对1800 例抗凝的血标本置37 ℃水浴15 ~ 30 min ,离心分离血浆与红细胞。正向定型:取试管3 支标记并加入抗A1、抗B 及抗D试剂2 滴,分别加入患者2 % ~ 4 %红细胞悬液1 滴,以3 000 r/ min 离心15 s ,观察结果,凝集为阳性,不凝集为阴性。反向定型: 取试管3 支标以Ac 、Bc 、Oc ,分别加入患者血浆2 滴,再加入2 % ~ 4 %ABO定型试剂红细胞1 滴。离心后观察结果,凝集为阳性,不凝集为阴性。
2 结果
将上述两种方法的鉴定结果进行比较,凡正反定型和卡式检测法检验相关血型不符合者,将血液红细胞用生理盐水洗涤3次,再用两种方法重复测定,作正确率比较。血型鉴定共1800例,正反定型和卡式检测法不一致23例,其中Rh(-)3例。经验证,卡式检测法正确率100%,正向定型正确率98.72%,正定型+反定型为100%。
3 讨论
微柱凝胶技术血型正定型具有检测敏感性高、特异性强、结果准确、易于观察、影响因素少等特点,卡式微柱凝胶法是抗原,抗体反应和凝胶分子筛技术相结合的检测法。它是通过葡聚糖凝胶的浓度来控制分子筛孔径大小,使分子筛只让游离分子通过,从而达到分离凝聚红细胞和游离红细胞的目的。为确保实验结果准确可靠,微柱凝胶技术对标本的质量也有严格的要求,如采集标本时未充分抗凝,使血浆中含有小凝块。或被细菌污染等,就有可能导致假阳性。 故最好要求留取血样必须新鲜,无溶血,并且要充分抗凝等。特别是不能随意缩短离心时间,标本必须离心,以免血清中的纤维蛋白丝影响试验结果及离心不彻底时血清中含纤维蛋白出现细胞“凝块”,出现假阳性。
本法操作简单,敏感性、特异性都高于手工正定型法。微柱凝胶血型鉴定法的高度敏感性,反定型时,微柱凝胶技术能使红细胞抗原与极微弱的相应的血型抗体发生阳性反应,说明微柱凝胶抗人球蛋白反应介质能加速和增强凝集反应,且凝集在微柱凝胶孔内的红色凝集颗粒清晰、明确,极易被观察到,可作为反定型检测低滴度血型抗体的有效方法[1]。由于用了凝胶分子筛技术,将凝集的,游离的红细胞分开,使结果一目了然。避免了操作上的主观影响[2],所要标本量少,操作容易,省去了繁锁的洗涤过程,不再耽心抗人球蛋白抗体被中和,而产生假阳性。也便于保存,一般而言,在冰箱中可保存半年至一年。还可进行拍照供永久记录,以备发生血型鉴定错误时查对原始资料。虽然微柱凝胶试剂价格比较贵,但从输血安全、操作安全和操作标准化角度考虑,应该推广微柱凝胶技术在临床血型鉴定中应用.
参考文献
[1] 陈才生,王雷萍,翁彬,等. 新生儿脐血ABO血型正反定型及交叉配血实验结果分析. 现代检验医学杂志,2007,22(1):61～63
[2]彭道波,兰炯采,王梁平,等.用微柱凝试验进行交叉配血[J].中国输血杂志,2001,14(4):232
【关键词】微柱凝胶技术;血型鉴定
【中图分类号】R476.5【文献标识码】B【文章编号】1005-0515(2010)009-0012-01
准确的血型鉴定是临床安全、有效输血的重要保证。微柱凝胶检测技术(MGI)是近几年刚传入我国的一种用于输血前检查的方法,是目前国际卫生组织推荐的最先进的微柱凝胶免疫检测技术。本血站自2007年6月~2009年12月对1800名献血者做了卡式法与手工操作的平行实验,并对结果进行了比较,现将比较的结论与相关分析报道于下。
1 材料和方法
1.1 试剂:微柱凝胶卡(抗A、抗B、抗D、A型红细胞、B型红细胞、clt管)、微柱凝胶多克隆抗人球卡、谱细胞、低离子液、离心机、孵育箱均由瑞士达亚美公司提供,手工试剂 :抗A、抗B血清为长春生物制品研究所生产。单克隆抗D为台湾贝索公司生产。
1.2 仪器:孵育器:Diamed-ID(达亚美) ID-Incubator 37SⅠ专用孵育器。离心机:Diamed-ID(达亚美) ID-Centrifuge 12SⅡ专用离心机。
1.3 检测方法。
1.3.1 卡式检测法:按达亚美公司卡氏血型鉴定手册进行。取Diamed-ID ABO/Rh 血型鉴定卡一个,标记病人的姓名 病历号等,撕去卡上的锡纸膜。配制 5%的红细胞悬液(25ul病人RBC+0.5ml Diluent2低离子缓冲液)在A.B.D孔分别加入10ul抗A抗B抗D,标准血清。在A.B.D孔分别加入已配制的2%病人红细胞悬液10ul,37℃孵育15分钟,离心,按说明书提示标准判读结果。
1.3.2 手工操作:试管法检测ABO、RhD 血型对1800 例抗凝的血标本置37 ℃水浴15 ~ 30 min ,离心分离血浆与红细胞。正向定型:取试管3 支标记并加入抗A1、抗B 及抗D试剂2 滴,分别加入患者2 % ~ 4 %红细胞悬液1 滴,以3 000 r/ min 离心15 s ,观察结果,凝集为阳性,不凝集为阴性。反向定型: 取试管3 支标以Ac 、Bc 、Oc ,分别加入患者血浆2 滴,再加入2 % ~ 4 %ABO定型试剂红细胞1 滴。离心后观察结果,凝集为阳性,不凝集为阴性。
2 结果
将上述两种方法的鉴定结果进行比较,凡正反定型和卡式检测法检验相关血型不符合者,将血液红细胞用生理盐水洗涤3次,再用两种方法重复测定,作正确率比较。血型鉴定共1800例,正反定型和卡式检测法不一致23例,其中Rh(-)3例。经验证,卡式检测法正确率100%,正向定型正确率98.72%,正定型+反定型为100%。
3 讨论
微柱凝胶技术血型正定型具有检测敏感性高、特异性强、结果准确、易于观察、影响因素少等特点,卡式微柱凝胶法是抗原,抗体反应和凝胶分子筛技术相结合的检测法。它是通过葡聚糖凝胶的浓度来控制分子筛孔径大小,使分子筛只让游离分子通过,从而达到分离凝聚红细胞和游离红细胞的目的。为确保实验结果准确可靠,微柱凝胶技术对标本的质量也有严格的要求,如采集标本时未充分抗凝,使血浆中含有小凝块。或被细菌污染等,就有可能导致假阳性。 故最好要求留取血样必须新鲜,无溶血,并且要充分抗凝等。特别是不能随意缩短离心时间,标本必须离心,以免血清中的纤维蛋白丝影响试验结果及离心不彻底时血清中含纤维蛋白出现细胞“凝块”,出现假阳性。
本法操作简单,敏感性、特异性都高于手工正定型法。微柱凝胶血型鉴定法的高度敏感性,反定型时,微柱凝胶技术能使红细胞抗原与极微弱的相应的血型抗体发生阳性反应,说明微柱凝胶抗人球蛋白反应介质能加速和增强凝集反应,且凝集在微柱凝胶孔内的红色凝集颗粒清晰、明确,极易被观察到,可作为反定型检测低滴度血型抗体的有效方法[1]。由于用了凝胶分子筛技术,将凝集的,游离的红细胞分开,使结果一目了然。避免了操作上的主观影响[2],所要标本量少,操作容易,省去了繁锁的洗涤过程,不再耽心抗人球蛋白抗体被中和,而产生假阳性。也便于保存,一般而言,在冰箱中可保存半年至一年。还可进行拍照供永久记录,以备发生血型鉴定错误时查对原始资料。虽然微柱凝胶试剂价格比较贵,但从输血安全、操作安全和操作标准化角度考虑,应该推广微柱凝胶技术在临床血型鉴定中应用.
参考文献
[1] 陈才生,王雷萍,翁彬,等. 新生儿脐血ABO血型正反定型及交叉配血实验结果分析. 现代检验医学杂志,2007,22(1):61～63
[2]彭道波,兰炯采,王梁平,等.用微柱凝试验进行交叉配血[J].中国输血杂志,2001,14(4):232