【摘 要】
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为了有效预防及治疗呼吸道合胞病毒(respiratory syncytial virus,RSV)感染引起的疾病,在CHO-S细胞中表达了人源化抗RSV病毒抗体。以pCHO1.0为载体,分别通过Eco RⅤ(5’)和Pa
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为了有效预防及治疗呼吸道合胞病毒(respiratory syncytial virus,RSV)感染引起的疾病,在CHO-S细胞中表达了人源化抗RSV病毒抗体。以pCHO1.0为载体,分别通过Eco RⅤ(5’)和PacⅠ(3’)、AvrⅡ(5’)和Bst Z17Ⅰ(3’)双酶切,将轻、重链克隆进载体,采用电转的方法,将构建好的质粒转染进CHO-S宿主细胞,通过嘌呤霉素和甲氨蝶呤压力筛选以及有限稀释法,获得能稳定表达抗体的单克隆细胞株。在摇瓶中进行仅补加葡萄糖的流加培养试验,CHO-S细胞在培养7 d时活细胞密度达到最大,为1.3×10~7 cells/ml,在培养12 d时细胞活性降低至80%以下,结束培养,最终抗体表达水平达到130 mg/L,上清液中抗体总活性达到2.90×10~5 IU/ml。经蛋白A亲和色谱纯化,抗体纯度达到98%以上。
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