【摘 要】
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目的：构建单链免疫毒素hscFv-ETA＇的原核表达载体,经表达后鉴定其对CML细胞的特异性杀伤作用.方法：采用亚克隆技术,首先将hscFv与截短的假单胞菌外毒素基因ETA＇通过酶切及连接反
【机 构】
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重庆医科大学检验医学院临床血液学教研室临床检验诊断学教育部重点实验室
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目的：构建单链免疫毒素hscFv-ETA＇的原核表达载体,经表达后鉴定其对CML细胞的特异性杀伤作用.方法：采用亚克隆技术,首先将hscFv与截短的假单胞菌外毒素基因ETA＇通过酶切及连接反应,在载体pWW20上构建hscFv-ETA＇单链免疫毒素基因;再将其亚克隆入pET32a（＋）原核表达载体中,转化BL21（DH3）宿主菌,IPTG诱导表达;SDS-PAGE观察其表达水平并建立目的蛋白的纯化方法,Western blot鉴定纯化的目的蛋白,FCM鉴定融合蛋白hscFv-ETA＇与细胞结合的活性以及诱
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