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【摘 要】 目的：分析提取高纯度积雪草总苷的相关制备工艺技术。方法：联合使用大孔树脂的分离技术和醋酸乙酯重结晶技术，以提取纯度最高的积雪草总苷为指标考察制备工艺参数，并建立检测积雪草总苷含量的方法。结果：采用洗脱剂为75%乙醇进行回流提取，选用HPD100型的大孔树脂进行富集，最后采用醋酸乙酯重结晶技术，提取出含量为90%以上的高纯度积雪草总苷。结论：该项制备工艺方法重复利用性好、稳定性高、提取纯度高等优势，可用于实际工业生产中。
【关键词】 积雪草总苷 乙醇回流 大孔树脂 重结晶 高纯度
积雪草在中药中是属于寒性药物，有解毒清热、消肿利湿的疗效，常常用于治疗腹泻、黄疸、痈肿等疾病，在医学临床上也用于治疗肝炎、脑膜炎等疾病，有调节机体免疫、抗氧化、抗肿瘤等功能，这都归功于积雪草中的活性成分三萜皂苷，其具有抑制细胞增生、抗肿瘤、抗氧化等功效[1]。本文主要是运用现代提取技术提取高纯度的积雪草总苷的相关制备工艺技术进行分析和研究。
1 仪器与实验材料
1.1 仪器设备
液相色谱仪为Agilent1100、二元梯度泵、电子称为Mettler AE 240、蒸馏器为SYZ-A、旋转蒸发仪为Buchi R210、大孔树脂型有HPD100、AB8 、D101。
1.2 实验材料
积雪草的生产批号是20080920、20080926，对照品中羟基积雪草苷生产批号是110893-200201、积雪草苷的生产批号是110892-200403、蒸馏水、甲醇、乙醇、醋酸乙酯、丙酮、正丁醇。
2 方法与结果
2.1 积雪草总苷含量检测方法
2.1.1 关于积雪草总苷提取液的制备
选取适量的积雪草总苷试验品，经Mettler AE 240电子称称量后记录，外加甲醇适量制成总量为5 mg/ml的积雪草总苷试验品，均匀混合后静置。
2.1.2 关于对照品提取液的制备
经电子称称出总量为12.8的积雪草苷，16.8的羟基积雪草苷，分别用甲醇溶解后，放置于10ml的计量瓶中，做好刻度标记。
2.2 乙醇回流工艺技术
2.2.1 总体回流提取
根据积雪草总苷特有的物理性质，本文采用浓度为75%的乙醇进行回流提取，详细做法是：将乙醇的容量加大，加到10倍的总量。分两次进行提取，每次提取的时间为一个小时，将经过过滤操作后的乙醇进行回收。
2.2.2 除杂处理
当使用体积分数相对高的乙醇进行提取时，可以提取到积雪草总苷和脂溶性物质，因此需要进行去除杂质处理。本文运用醇提水沉的工艺技术，使得积雪草醇提取液浓缩到1mg/ml。最后加4倍容量的蒸馏水，混合搅拌，然后提取离心液。
2.3 大孔树脂富集工艺
2.3.1 大孔树脂型号选择
根据相关的文献研究得知，苯乙烯型的大孔树脂对积雪草总苷中的主要活性成分三萜皂苷有很好的吸附分离作用。所以，本文中在选择大孔树脂型号时采用HPD100、AB8和D101进行对比，选出最优的型号。将积雪草水提取溶液平均分成3份，根据生药材和湿树脂比例为2：1的形式将溶液分别放置到三种不同型号的大孔树脂柱上，通过树脂柱的流量速度设置为0.5 BV/h。通过对比，得知型号为HPD100在积雪草总苷的洗脱水平上效果最优。因此本文采用大孔树脂型号为HPD100进行富集。
2.3.2 洗脱剂乙醇体积分数选择
将积雪草水提取溶液平均分成3份，根据生药材和湿树脂比例为2：1的形式将溶液分别放置到 HPD100大孔树脂柱内，以此用浓度为40%、50%、70%的乙醇同时以1 BV/h的流量速度进行洗脱。通过一一比较，得知采用浓度为50%的乙醇进行洗脱后提取出的羟基积雪草苷和积雪草苷总量相对其他浓度的高。因此本文采用50%的乙醇进行洗脱。
2.4 重结晶技术
经过大孔树脂富集操作后，提取出的积雪草总苷其质量以达65%左右，为了提取更高纯度的积雪草总苷，接下来的工作就是纯化。通常在纯化操作中使用最多的就是结晶技术和萃取技术。其中，结晶技术有醋酸乙酯和丙酮，萃取技术是正丁醇，通过对这三种技术进行比较，选出最好的纯化方法。通过对比，醋酸乙酯的重结晶技术效果最佳，详细对比见表1。
3 讨论
按照本文的分析报告，得出提取高纯度积雪草总苷的最好的制备工艺技术为：积雪草药材通过浓度为75%的乙醇进行回流提取，将乙醇的容量加大，加到10倍的总量。分两次进行提取，每次提取的时间为一个小时，将滤液进行减压后，浓缩到1mg/ml，加4倍量的蒸馏水，混合后冷藏，根据生药材和湿树脂比例为2：1的形式将溶液分别放置到 HPD100大孔树脂柱内，将通过树脂柱的流量速度设置为0.5 BV/h，用50%的乙醇进行洗脱，流量速度设置为1 BV/h，将洗脱好的溶液进行减压处理后加甲醇溶解，最后加入8倍体积的醋酸乙酯溶解进行结晶。通过一些列的操作，可知，该项制备工艺技术用于提取积雪草总苷其具有重复利用性好、稳定性高、提取纯度高等优势，可用于实际工业生产中。
参考文献
[1]陈俊，张小龙，杨时，原少伟，丁岗，王振中，萧伟.高纯度积雪草总苷的制备工艺研究[J].中草药.2014，45（4）：504-505.
[2]杜建平，孙冬梅.积雪草总苷大孔树脂纯化工艺研究[J].江西中医学院学报.2012，24（2）：39-40.
作者简介：吴媛，女，汉族，（1982-10），上海杨浦区，单位：上海交通大学医学院附属第九人民医院，本科学历，研究方向：中药学200011
【关键词】 积雪草总苷 乙醇回流 大孔树脂 重结晶 高纯度
积雪草在中药中是属于寒性药物，有解毒清热、消肿利湿的疗效，常常用于治疗腹泻、黄疸、痈肿等疾病，在医学临床上也用于治疗肝炎、脑膜炎等疾病，有调节机体免疫、抗氧化、抗肿瘤等功能，这都归功于积雪草中的活性成分三萜皂苷，其具有抑制细胞增生、抗肿瘤、抗氧化等功效[1]。本文主要是运用现代提取技术提取高纯度的积雪草总苷的相关制备工艺技术进行分析和研究。
1 仪器与实验材料
1.1 仪器设备
液相色谱仪为Agilent1100、二元梯度泵、电子称为Mettler AE 240、蒸馏器为SYZ-A、旋转蒸发仪为Buchi R210、大孔树脂型有HPD100、AB8 、D101。
1.2 实验材料
积雪草的生产批号是20080920、20080926，对照品中羟基积雪草苷生产批号是110893-200201、积雪草苷的生产批号是110892-200403、蒸馏水、甲醇、乙醇、醋酸乙酯、丙酮、正丁醇。
2 方法与结果
2.1 积雪草总苷含量检测方法
2.1.1 关于积雪草总苷提取液的制备
选取适量的积雪草总苷试验品，经Mettler AE 240电子称称量后记录，外加甲醇适量制成总量为5 mg/ml的积雪草总苷试验品，均匀混合后静置。
2.1.2 关于对照品提取液的制备
经电子称称出总量为12.8的积雪草苷，16.8的羟基积雪草苷，分别用甲醇溶解后，放置于10ml的计量瓶中，做好刻度标记。
2.2 乙醇回流工艺技术
2.2.1 总体回流提取
根据积雪草总苷特有的物理性质，本文采用浓度为75%的乙醇进行回流提取，详细做法是：将乙醇的容量加大，加到10倍的总量。分两次进行提取，每次提取的时间为一个小时，将经过过滤操作后的乙醇进行回收。
2.2.2 除杂处理
当使用体积分数相对高的乙醇进行提取时，可以提取到积雪草总苷和脂溶性物质，因此需要进行去除杂质处理。本文运用醇提水沉的工艺技术，使得积雪草醇提取液浓缩到1mg/ml。最后加4倍容量的蒸馏水，混合搅拌，然后提取离心液。
2.3 大孔树脂富集工艺
2.3.1 大孔树脂型号选择
根据相关的文献研究得知，苯乙烯型的大孔树脂对积雪草总苷中的主要活性成分三萜皂苷有很好的吸附分离作用。所以，本文中在选择大孔树脂型号时采用HPD100、AB8和D101进行对比，选出最优的型号。将积雪草水提取溶液平均分成3份，根据生药材和湿树脂比例为2：1的形式将溶液分别放置到三种不同型号的大孔树脂柱上，通过树脂柱的流量速度设置为0.5 BV/h。通过对比，得知型号为HPD100在积雪草总苷的洗脱水平上效果最优。因此本文采用大孔树脂型号为HPD100进行富集。
2.3.2 洗脱剂乙醇体积分数选择
将积雪草水提取溶液平均分成3份，根据生药材和湿树脂比例为2：1的形式将溶液分别放置到 HPD100大孔树脂柱内，以此用浓度为40%、50%、70%的乙醇同时以1 BV/h的流量速度进行洗脱。通过一一比较，得知采用浓度为50%的乙醇进行洗脱后提取出的羟基积雪草苷和积雪草苷总量相对其他浓度的高。因此本文采用50%的乙醇进行洗脱。
2.4 重结晶技术
经过大孔树脂富集操作后，提取出的积雪草总苷其质量以达65%左右，为了提取更高纯度的积雪草总苷，接下来的工作就是纯化。通常在纯化操作中使用最多的就是结晶技术和萃取技术。其中，结晶技术有醋酸乙酯和丙酮，萃取技术是正丁醇，通过对这三种技术进行比较，选出最好的纯化方法。通过对比，醋酸乙酯的重结晶技术效果最佳，详细对比见表1。
3 讨论
按照本文的分析报告，得出提取高纯度积雪草总苷的最好的制备工艺技术为：积雪草药材通过浓度为75%的乙醇进行回流提取，将乙醇的容量加大，加到10倍的总量。分两次进行提取，每次提取的时间为一个小时，将滤液进行减压后，浓缩到1mg/ml，加4倍量的蒸馏水，混合后冷藏，根据生药材和湿树脂比例为2：1的形式将溶液分别放置到 HPD100大孔树脂柱内，将通过树脂柱的流量速度设置为0.5 BV/h，用50%的乙醇进行洗脱，流量速度设置为1 BV/h，将洗脱好的溶液进行减压处理后加甲醇溶解，最后加入8倍体积的醋酸乙酯溶解进行结晶。通过一些列的操作，可知，该项制备工艺技术用于提取积雪草总苷其具有重复利用性好、稳定性高、提取纯度高等优势，可用于实际工业生产中。
参考文献
[1]陈俊，张小龙，杨时，原少伟，丁岗，王振中，萧伟.高纯度积雪草总苷的制备工艺研究[J].中草药.2014，45（4）：504-505.
[2]杜建平，孙冬梅.积雪草总苷大孔树脂纯化工艺研究[J].江西中医学院学报.2012，24（2）：39-40.
作者简介：吴媛，女，汉族，（1982-10），上海杨浦区，单位：上海交通大学医学院附属第九人民医院，本科学历，研究方向：中药学200011