【摘 要】
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DNA克隆技术是分子生物学和基因工程研究必备的工具之一，但传统的以限制性内切酶酶切/连接为手段的克隆技术存在依赖限制性内切酶、连接效率低、耗时长和引入额外序列等缺点。近年来，无缝克隆技术发展迅猛，大量商业化克隆试剂盒也趋于成熟并在实验室被广泛应用，有力推动了蛋白质工程以及合成生物学的发展。本文从无缝克隆原理出发，对近年来发展出来的基于外切酶、PCR技术、同源重组、热稳定的连接酶等原理的无缝克隆技术
【基金项目】
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山东技术创新计划项目（201720311004）；
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DNA克隆技术是分子生物学和基因工程研究必备的工具之一，但传统的以限制性内切酶酶切/连接为手段的克隆技术存在依赖限制性内切酶、连接效率低、耗时长和引入额外序列等缺点。近年来，无缝克隆技术发展迅猛，大量商业化克隆试剂盒也趋于成熟并在实验室被广泛应用，有力推动了蛋白质工程以及合成生物学的发展。本文从无缝克隆原理出发，对近年来发展出来的基于外切酶、PCR技术、同源重组、热稳定的连接酶等原理的无缝克隆技术进行了分类和讨论。新酶资源的不断发现，如核酸外切酶XthA，FnCas12a突变体，和现有技术的相互融合，如RecE/T重组和核酸外切酶共同使用，将有力推动无缝克隆技术的发展。
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