EGFR可溶性胞外段的表达、纯化及鉴定

来源 :药物生物技术 | 被引量 : 0次 | 上传用户:hakhid
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
利用大肠杆菌表达表皮生长因子受体胞外段(ED-EGFR),将目的基因片段插入到pET28a载体中,将插入目的基因载体转化入BL21表达.利用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(ITPG)诱导BL21表达ED-EGFR,破碎后80%的ED-EGFR为可溶性表达,其他则存在包涵体中,将菌液离心上清通过镍柱亲和层析纯化,纯化蛋白样品经过胶浓度为12% SDS-PAGE电泳,条带在相对分子质量58 k左右出现单一条带,并且纯度达到95%以上.通过BCA检测蛋白浓度,利用CCK8方法检测ED-EGFR具有较高活性,人肺非小细胞癌细胞(H1648细胞)增殖明显被抑制,并且在浓度320 ng/mL下抑制效果最好.“,”The target gene fragment was inserted into the pET28a vector.The target gene vector was inserted into BL21 to express the extracellular fraction of epidermal growth factor receptor (ED-EGFR).The expression of ED-EGFR in BL21 was induced with isopropyl-3-D-thiogalactoside (ITPG).80% of ED-EGFR was expressed as soluble after disintegration.Others were existing in inclusion bodies.The purity of the purified protein sample was 12% by SDS-PAGE.The band was a single band at about 58 ku,and the purity was over 95%.The proliferation of human lung non-small cell carcinoma cells (H1648 cells) was inhibited by CCK8 method,and the inhibitory effect was the best at the concentration of 320 ng/mL.
其他文献
构建重组p ET28a(+)-rReg3β表达质粒,转入T7 Expression E.coli表达菌,获得鼠源重组Reg3β表达菌株,经IPTG诱导后以包涵体形式表达重组Reg3β蛋白。重组Reg3β蛋白通过裂解
柠檬酸转运蛋白(Na CT)为新发现的钠离子偶联的羧酸转运蛋白家族的一员,主要功能是负责转运三羧酸循环的中间体,近年来研究发现Na CT可能是治疗糖尿病和肥胖症的重要药物靶点
为增强神经型乙酰胆碱受体(n AChR)蛋白的稳定性和表达量,以满足晶体学研究的要求。根据同源蛋白的氨基酸序列比对结果,设计了胞内5个切除位点,设计合适的引物,利用分子克隆
以赖氨酸(Lys)修饰阳离子交换树脂D155合成出赖氨酸修饰两性阳离子交换树脂(Lys-D155),再以该树脂为载体,制备出固定化腈水解酶(I-Nit-D155),最后以I-Nit-D155为催化剂水解R,
谷胱甘肽是广泛存在于生物体内的生物活性三肽化合物,因其具有重要的生理功能而在医药、食品、化妆品等行业有着广泛的应用,该研究克隆了来自Listeria monocytogenes的谷胱甘
本文合成了普朗尼克F127-壳聚糖(F127-CS)和普朗尼克F127-半胱氨酸(F127-CT)共聚物,采用薄膜分散法以F127-CS、F127-CT和胆酸钠(NaC)为材料构建了聚离子复合物胶束,并以该复
目的: 通过对细胞周期蛋白(CYCLIN) D1 及其与细胞增殖和细胞凋亡在牙齿发生、发育过程中的关系研究,以探讨牙齿发育的机制.方法:选用纯系 S D 大鼠建立牙齿发育模型,采用原
为寻找ETBR特异性激动剂/拮抗剂,需建立一种灵敏度高、操作简单的受体-配体结合检测体系.从人肺腺癌细胞系A549中克隆人ETBR基因,将其连接至pTag-liteTM-SNAP质粒内,成功构建
研究在大肠杆菌中表达重组人胱抑素C(Cystatin C,Cys C)重链单域抗体(Variable domain of the heavy chain of heavy-chain antibody,VHH),经纯化和复性后,建立测定人血清Cys
(GB7714-2005)[期刊]:作者(3位以上者,列出前3位并加等).文题[J].刊名,出版年,卷(期):起—迄页码.[图书]:编者(3位以上者,列出前3位并加等).图书名[M].版次.出版地:出版者,出