【摘 要】
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目的为了使液相交在检测更加灵敏、特异、快速.方法通过改进杂交液的成分,选择最佳的探针浓度,使5'端标记生物素的PCR扩增产物与5'端标记地高辛的探针在PCR反应管中
【机 构】
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第四军医大学全军基因诊断技术研究所,西安交通大学医学院公共卫生系
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目的为了使液相交在检测更加灵敏、特异、快速.方法通过改进杂交液的成分,选择最佳的探针浓度,使5'端标记生物素的PCR扩增产物与5'端标记地高辛的探针在PCR反应管中进行液相杂交,杂交条件为:94℃10s冷却到37℃10s即完成杂交.杂交后产物通过链霉素亲和素被固定在微孔表面,同时在含高浓度DMSO的杂交液中将非特异结合的探针解离,然后对被固定的特异杂交产物进行ELISA检测.结果液相杂交的条件优化:杂交液中DMSO浓度为300ml/L,探针浓度为0.5μmol/L,杂交温度为37℃.对60
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