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摘 要：本实验建立反相高效液相色谱法测定舒筋外洗颗粒中虎杖苷的含量并对其质量稳定性进行考察。方法：固定相为奥泰公司C18色谱柱（220 mm×4.6mm，5μm），甲醇-乙腈-水（5：25：70）为流动相，检测波长为303nm，流速1.0mL·min-1，柱温：30℃。本文对舒筋外洗颗粒中的虎杖苷进行含量测定，结果表明该法不受其它成分的干扰，分离度好，精密度、重现性佳，可用于舒筋外洗颗粒中虎杖苷的含量测定；舒筋外洗颗粒质量稳定，可存放36月。
关键词：舒筋外洗颗粒；质量；稳定
舒筋外洗颗粒具有温经通络，消肿止痛的功效。虎杖为舒筋外洗颗粒主要成分之一。虎杖别名为花斑竹、酸筒杆、川筋龙、斑庄、斑杖根等，具有清热解毒、散瘀定痛、利胆退黄、祛风利湿、止咳化痰等功效。虎杖常用于关节痹痛、湿热黄疸、咳嗽痰多、跌扑损伤、癓瘕、痈肿疮毒等。《滇南本草》记载：“攻诸肿毒，止咽喉疼痛，利小便，走经络。治五淋白浊，痔漏，疮痈，妇人赤白带下。”虎杖具有抗心肌缺血/再灌注损伤、保护心肌、抗肿瘤、抗脑出血、改善学习记忆力等作用[1-5]。本实验建立反相高效液相色谱法测定舒筋外洗颗粒中虎杖苷的含量并对其质量稳定性进行考察。
1 仪器与试药
Aurora-F1实验室自动洗瓶机（杭州喜瓶者生物技术有限公司）、TH-W50GC多功能全自动纯水机（武汉市天虹仪表有限责任公司）、P230高效液相色谱仪（大连依利特分析仪器有限公司）、超声波清洗器US-3M（中科仪（北京）仪器有限公司）、HH.S11-1电热恒温水浴锅（上海昨非实验室设备有限公司）、FA1204CFAC型全自動內校電子分析天平（北京同德创业科技有限公司）、YOKO-2005双波长薄层色谱扫仪（武汉药科新技术开发有限公司）。虎杖苷对照品由中国药品生物制品检定所提供。乙腈（上海金锦乐实业有限公司）、冰醋酸（上海拜力生物科技有限公司）、磷酸二氢钾（上海拜力生物科技有限公司）、三乙胺（湖北巨龙堂医药化工有限公司）、甲醇（上海金锦乐实业有限公司）、磷酸（湖北巨龙堂医药化工有限公司）、醋酸钠（湖北巨龙堂医药化工有限公司）、磷酸二氢铵（湖北巨龙堂医药化工有限公司）。
2 含量测定
2.1 色谱条件：依据查阅文献及考查的结果，确定色谱条件如下[6-9]。色谱柱为奥泰公司C18色谱柱（220mm×4.6mm，5μm）；甲醇-乙腈-水（5：25：70）为流动相；检测波长为303nm。理论板数按虎杖苷峰计算应不得低于2000。
2.2 供试品溶液的制备
取舒筋外洗颗粒，精密称定，置10毫升容量瓶内中，加入适量流动相，超声处理10分钟，放冷至室温，加流动相稀释至刻度，摇匀，滤过。取续滤液，即得。
2.3 对照品溶液的制备
精密称取虎杖苷对照品适量，用甲醇溶解并稀释成每1ml中含10μg的溶液，作为对照溶液。
2.4 阴性溶液的制备
取除虎杖以外的原辅料，按照供试品溶液的制备方法制成阴性液，依上述方法测定，结果在虎杖苷出峰处阴性液无色谱峰，结果阴性试验没有干扰，表明本方法专属性良好。
2.5 准曲线的制备
精密称取虎杖苷对照品10.0mg，置25ml容量瓶中，加入甲醇溶液使溶解并稀释至刻度，摇匀，分别精密吸取0.2、0.4、0.6、1.2、1.6、2.0mL，置于10mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀。分别精密上述溶液吸取10μL，注人液相色谱仪，依照2.1项下的色谱条件测定，记录色谱峰。以峰面积（Y）为纵坐标，对照品进样量（X）为横坐标，绘制标准曲线。结果表明，虎杖苷在8～80μg·mL-1范围内呈良好的线性关系。
2.6 精密度试验
精密吸取虎杖苷对照品溶液20μL重复进样6次，测定峰面积积分值，对照品峰面积积分值的RSD为0.79%。结果表明，本实验精密度良好。
2.7 重现性试验
分别称取同批舒筋外洗颗粒样品6份，测定含量，并计算样品的RSD值，结果RSD为0.69%，结果表明此方法的重现性良好。
2.8 稳定性试验
依照2.3项下供试品制备方法制备供试品溶液，分别在0，2，4小时精密吸取供试品溶液注入液相色谱仪，进样测定，供试品虎杖苷峰面积积分值的RSD为0.71%。结果表明虎杖苷至少在4小時内稳定。
2.9 准确度试验
取对照品适量，精密称取已知含量的样品9份，置量瓶中，分别精密加入虎杖苷对照品，按项下方法制备成120%、140%、160%。取模拟样品照“含量测定”项下方法试验，计算回收率为99.2%，RSD为0.95%。
3 稳定性考察方法
将本品置于30℃的恒温箱内，分别于第1、2、3、12、24、36个月末取样并测定，考察外观、重量差异、微生物限度、含量的测定结果做比较。放置36个月后，舒筋外洗颗粒未发生明显变化。经测定发现，外观、重量差异、微生物限度、含量均稳定，表明舒筋外洗颗粒可以存放36个月。
4 讨论
分别考察含1%醋酸0.025mol.L-1醋酸铵溶液-乙腈（75∶25），乙腈-水-三乙胺（30：70：0.1），甲醇-水（35：65），甲醇-水（40：60），甲醇：2%冰醋酸水溶液（20∶80），甲醇-水-磷酸（50∶50∶0.3），甲醇-乙腈-水（5：25：70），水-乙腈-三乙胺（80∶20：0.01）不同比例的流动相，结果以甲醇-乙腈-水（5：25：70）为流动相，供试品各峰分离效果最好，故选用甲醇-乙腈-水（5：25：70）为流动相。此方法简便、准确、重现性好，可用于舒筋外洗颗粒中虎杖苷的含量测定。舒筋外洗颗粒质量稳定，可存放36月。
参考文献
[1]赵娟，李海英，王佐妤，佟长青.白藜芦醇苷对阿霉素致心肌损伤大鼠心肌超微结构的影响[J].武警医学院学报，2010（08）.
[2]刘铭，刘华，张国平，张宇燕，万海同，杨洁红.虎杖苷对脑出血性损伤大鼠血清白细胞介素-1β和脑组织Bcl-2蛋白表达的影响[J].中草药，
2010（12）.
[3]肖铭甲，陈卫红，吴炜，郭文，赵克森，赵明.虎杖苷抑制ox-LDL诱导的脂质过氧化并下调巨噬细胞清道夫受体CD36表达[J].中国病理生理杂志，2010（07）.
[4]刘华，张国平，别晓东，刘铭，杨洁红，万海同，张宇燕.虎杖苷对大鼠脑出血性损伤脑脊液中兴奋性氨基酸动态变化的影响[J].中国中药杂志，2010（22）.
[5]曲云霞.白藜芦醇甙对新生大鼠缺氧缺血性脑损伤远期学习记忆能力的改善及其机制的研究[D].大连医科大学，2010.
[6]林建海，焦文建，唐跃年.高效液相色谱法测定虎杖注射液中白藜芦醇苷含量[J].中国药房，2001（08）.
[7]张清峰，付莹娟，陈继光.高效液相色谱法同时测定虎杖中五种活性成分[J].上官新晨.现代食品科技，2014（03）.
[8]王如峰，王敏，安燕南，白根本，马群.HPLC指纹图谱法评价市售虎杖饮片的质量一致性[J].中药材，2013（04）.
[9]于秀华，张敏，王明星.HPLC法测定前列达康片中虎杖苷与大黄素的含量[J].中国药师，2007（11）.
关键词：舒筋外洗颗粒；质量；稳定
舒筋外洗颗粒具有温经通络，消肿止痛的功效。虎杖为舒筋外洗颗粒主要成分之一。虎杖别名为花斑竹、酸筒杆、川筋龙、斑庄、斑杖根等，具有清热解毒、散瘀定痛、利胆退黄、祛风利湿、止咳化痰等功效。虎杖常用于关节痹痛、湿热黄疸、咳嗽痰多、跌扑损伤、癓瘕、痈肿疮毒等。《滇南本草》记载：“攻诸肿毒，止咽喉疼痛，利小便，走经络。治五淋白浊，痔漏，疮痈，妇人赤白带下。”虎杖具有抗心肌缺血/再灌注损伤、保护心肌、抗肿瘤、抗脑出血、改善学习记忆力等作用[1-5]。本实验建立反相高效液相色谱法测定舒筋外洗颗粒中虎杖苷的含量并对其质量稳定性进行考察。
1 仪器与试药
Aurora-F1实验室自动洗瓶机（杭州喜瓶者生物技术有限公司）、TH-W50GC多功能全自动纯水机（武汉市天虹仪表有限责任公司）、P230高效液相色谱仪（大连依利特分析仪器有限公司）、超声波清洗器US-3M（中科仪（北京）仪器有限公司）、HH.S11-1电热恒温水浴锅（上海昨非实验室设备有限公司）、FA1204CFAC型全自動內校電子分析天平（北京同德创业科技有限公司）、YOKO-2005双波长薄层色谱扫仪（武汉药科新技术开发有限公司）。虎杖苷对照品由中国药品生物制品检定所提供。乙腈（上海金锦乐实业有限公司）、冰醋酸（上海拜力生物科技有限公司）、磷酸二氢钾（上海拜力生物科技有限公司）、三乙胺（湖北巨龙堂医药化工有限公司）、甲醇（上海金锦乐实业有限公司）、磷酸（湖北巨龙堂医药化工有限公司）、醋酸钠（湖北巨龙堂医药化工有限公司）、磷酸二氢铵（湖北巨龙堂医药化工有限公司）。
2 含量测定
2.1 色谱条件：依据查阅文献及考查的结果，确定色谱条件如下[6-9]。色谱柱为奥泰公司C18色谱柱（220mm×4.6mm，5μm）；甲醇-乙腈-水（5：25：70）为流动相；检测波长为303nm。理论板数按虎杖苷峰计算应不得低于2000。
2.2 供试品溶液的制备
取舒筋外洗颗粒，精密称定，置10毫升容量瓶内中，加入适量流动相，超声处理10分钟，放冷至室温，加流动相稀释至刻度，摇匀，滤过。取续滤液，即得。
2.3 对照品溶液的制备
精密称取虎杖苷对照品适量，用甲醇溶解并稀释成每1ml中含10μg的溶液，作为对照溶液。
2.4 阴性溶液的制备
取除虎杖以外的原辅料，按照供试品溶液的制备方法制成阴性液，依上述方法测定，结果在虎杖苷出峰处阴性液无色谱峰，结果阴性试验没有干扰，表明本方法专属性良好。
2.5 准曲线的制备
精密称取虎杖苷对照品10.0mg，置25ml容量瓶中，加入甲醇溶液使溶解并稀释至刻度，摇匀，分别精密吸取0.2、0.4、0.6、1.2、1.6、2.0mL，置于10mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀。分别精密上述溶液吸取10μL，注人液相色谱仪，依照2.1项下的色谱条件测定，记录色谱峰。以峰面积（Y）为纵坐标，对照品进样量（X）为横坐标，绘制标准曲线。结果表明，虎杖苷在8～80μg·mL-1范围内呈良好的线性关系。
2.6 精密度试验
精密吸取虎杖苷对照品溶液20μL重复进样6次，测定峰面积积分值，对照品峰面积积分值的RSD为0.79%。结果表明，本实验精密度良好。
2.7 重现性试验
分别称取同批舒筋外洗颗粒样品6份，测定含量，并计算样品的RSD值，结果RSD为0.69%，结果表明此方法的重现性良好。
2.8 稳定性试验
依照2.3项下供试品制备方法制备供试品溶液，分别在0，2，4小时精密吸取供试品溶液注入液相色谱仪，进样测定，供试品虎杖苷峰面积积分值的RSD为0.71%。结果表明虎杖苷至少在4小時内稳定。
2.9 准确度试验
取对照品适量，精密称取已知含量的样品9份，置量瓶中，分别精密加入虎杖苷对照品，按项下方法制备成120%、140%、160%。取模拟样品照“含量测定”项下方法试验，计算回收率为99.2%，RSD为0.95%。
3 稳定性考察方法
将本品置于30℃的恒温箱内，分别于第1、2、3、12、24、36个月末取样并测定，考察外观、重量差异、微生物限度、含量的测定结果做比较。放置36个月后，舒筋外洗颗粒未发生明显变化。经测定发现，外观、重量差异、微生物限度、含量均稳定，表明舒筋外洗颗粒可以存放36个月。
4 讨论
分别考察含1%醋酸0.025mol.L-1醋酸铵溶液-乙腈（75∶25），乙腈-水-三乙胺（30：70：0.1），甲醇-水（35：65），甲醇-水（40：60），甲醇：2%冰醋酸水溶液（20∶80），甲醇-水-磷酸（50∶50∶0.3），甲醇-乙腈-水（5：25：70），水-乙腈-三乙胺（80∶20：0.01）不同比例的流动相，结果以甲醇-乙腈-水（5：25：70）为流动相，供试品各峰分离效果最好，故选用甲醇-乙腈-水（5：25：70）为流动相。此方法简便、准确、重现性好，可用于舒筋外洗颗粒中虎杖苷的含量测定。舒筋外洗颗粒质量稳定，可存放36月。
参考文献
[1]赵娟，李海英，王佐妤，佟长青.白藜芦醇苷对阿霉素致心肌损伤大鼠心肌超微结构的影响[J].武警医学院学报，2010（08）.
[2]刘铭，刘华，张国平，张宇燕，万海同，杨洁红.虎杖苷对脑出血性损伤大鼠血清白细胞介素-1β和脑组织Bcl-2蛋白表达的影响[J].中草药，
2010（12）.
[3]肖铭甲，陈卫红，吴炜，郭文，赵克森，赵明.虎杖苷抑制ox-LDL诱导的脂质过氧化并下调巨噬细胞清道夫受体CD36表达[J].中国病理生理杂志，2010（07）.
[4]刘华，张国平，别晓东，刘铭，杨洁红，万海同，张宇燕.虎杖苷对大鼠脑出血性损伤脑脊液中兴奋性氨基酸动态变化的影响[J].中国中药杂志，2010（22）.
[5]曲云霞.白藜芦醇甙对新生大鼠缺氧缺血性脑损伤远期学习记忆能力的改善及其机制的研究[D].大连医科大学，2010.
[6]林建海，焦文建，唐跃年.高效液相色谱法测定虎杖注射液中白藜芦醇苷含量[J].中国药房，2001（08）.
[7]张清峰，付莹娟，陈继光.高效液相色谱法同时测定虎杖中五种活性成分[J].上官新晨.现代食品科技，2014（03）.
[8]王如峰，王敏，安燕南，白根本，马群.HPLC指纹图谱法评价市售虎杖饮片的质量一致性[J].中药材，2013（04）.
[9]于秀华，张敏，王明星.HPLC法测定前列达康片中虎杖苷与大黄素的含量[J].中国药师，2007（11）.