【摘 要】
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为研究牦牛(Bos grunniens)B 细胞淋巴瘤2相关蛋白 A1(B cell lymphoma 2 related protein A1,BCL2A1)的原核表达及体外活性.采用原核表达载体构建、细胞划痕实验、CCK-8法、透射电镜和实时荧光定量PCR等方法.结果显示,成功构建pET-32a-BCL2Al重组质粒,表达获得约33 kDa的BCL2A1.终浓度为0.02 μg/mL、0.2 μg/mL,2.0 μg/mL的BCL2A1均能使HepG2细胞活性显著降低(P＜0.05),并在一定程度上抑
【机 构】
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西南民族大学动物科学国家民委重点实验室,成都610041
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为研究牦牛(Bos grunniens)B 细胞淋巴瘤2相关蛋白 A1(B cell lymphoma 2 related protein A1,BCL2A1)的原核表达及体外活性.采用原核表达载体构建、细胞划痕实验、CCK-8法、透射电镜和实时荧光定量PCR等方法.结果显示,成功构建pET-32a-BCL2Al重组质粒,表达获得约33 kDa的BCL2A1.终浓度为0.02 μg/mL、0.2 μg/mL,2.0 μg/mL的BCL2A1均能使HepG2细胞活性显著降低(P＜0.05),并在一定程度上抑制细胞的迁移.2.0μg/mLBCL2Al导致HepG2细胞核固缩,胞质中高密度物质聚集,溶酶体吞噬形成致密的凋亡小体等.此外,细胞凋亡相关基因CASP9的mRNA水平在2.0μg/mL组中显著上调(P＜0.05),CASP8的mRNA水平在0.2 μg/mL和2.0 μg/mL组中显著上调(P＜0.05),而CASP3和Cyt c的mRNA水平在3个浓度处理组均显著上调(P＜0.05).这提示BCL2A1可能通过凋亡途径影响HepG2细胞活性,为进一步探索牦牛BCL2Al基因功能积累资料.
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