【摘 要】
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[目的]探讨桂枝加葛根汤在体外力学刺激诱导的大鼠终板软骨细胞退变中的作用与机制.[方法]分离培养大鼠的终板软骨细胞,采用Flexcell FX-5000TM细胞应力加载系统建立终板软骨细胞退变模型,实验分为对照组、模型组、桂枝加葛根汤组(造模前200 mL/L桂枝加葛根汤含药血清处理细胞24 h)、桂枝加葛根汤+SDF-1α组(造模前200 mL/L桂枝加葛根汤含药血清和100μg/L SDF-1α处理细胞24 h).CCK-8法和流式细胞术检测细胞增殖与凋亡,甲苯胺蓝染色与鬼笔环肽染色观察细胞形态变化,
【机 构】
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新疆医科大学第六附属医院创伤骨科,乌鲁木齐 830002;新疆医科大学第六附属医院中医科,乌鲁木齐 830002
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[目的]探讨桂枝加葛根汤在体外力学刺激诱导的大鼠终板软骨细胞退变中的作用与机制.[方法]分离培养大鼠的终板软骨细胞,采用Flexcell FX-5000TM细胞应力加载系统建立终板软骨细胞退变模型,实验分为对照组、模型组、桂枝加葛根汤组(造模前200 mL/L桂枝加葛根汤含药血清处理细胞24 h)、桂枝加葛根汤+SDF-1α组(造模前200 mL/L桂枝加葛根汤含药血清和100μg/L SDF-1α处理细胞24 h).CCK-8法和流式细胞术检测细胞增殖与凋亡,甲苯胺蓝染色与鬼笔环肽染色观察细胞形态变化,免疫荧光染色检测细胞中CXC趋化因子受体4(CXCR4)阳性表达,逆转录-聚合酶链式反应(qRT-PCR)和蛋白免疫印迹法(Western blot)分别检测细胞中Ⅱ型胶原纤维α1(COL2A1)、HMG盒超家族成员9(SOX9)mRNA与蛋白表达水平变化.[结果]与对照组比较,大鼠终板软骨细胞在力学刺激后细胞活性下降(P<0.05),细胞凋亡率增加(P<0.05),细胞出现退变,且形态由多边形变成纺锤形,细胞中COL2A1、SOX9 mRNA与蛋白的相对表达量均下降(P<0.05);与模型组比较,加入桂枝加葛根汤处理的终板软骨细胞活性升高(P<0.05),细胞凋亡率降低(P<0.05),细胞退变得到抑制,细胞形态改变有所减轻,同时,COL2A1、SOX9 mRNA与蛋白的相对表达量升高(P<0.05),而在桂枝加葛根汤与SDF-1α共培养的细胞中未发现改善作用.[结论]桂枝加葛根汤可体外干预SDF-1/CXCR4信号通路,阻断SDF-1与软骨细胞表面的CXCR4受体结合,减轻大鼠椎间盘终板软骨细胞退变.
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