【摘 要】
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SIgA是评价黏膜免疫的重要指标,分泌片(SC)是SIgA的特有成分,为了更方便的获得大量的SIgA的分泌片,本试验应用RT-PCR方法扩增出SC基因片段,将SC基因片段克隆到pGEX-4T-1原核
【机 构】
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广东海大集团股份有限公司畜牧水产研究中心海大中央研究院农业农村部微生态资源养殖利用重点实验室; 广东海大畜牧兽医研究院; 吉林大学动物医学学院;
【基金项目】
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博士后科研(基金配套)项目经费(4000826);广东海大畜牧兽医研究院基于畜禽重要疫病诊断技术院士工作站(2017B090904029);猪重要疫病快速诊断试剂的研发及产业化(201804020006)
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SIgA是评价黏膜免疫的重要指标,分泌片(SC)是SIgA的特有成分,为了更方便的获得大量的SIgA的分泌片,本试验应用RT-PCR方法扩增出SC基因片段,将SC基因片段克隆到pGEX-4T-1原核表达载体上,获得pGEX-4T-1-SC重组质粒,经酶切和测序验证后,利用大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞和IPTG,诱导SC重组蛋白的表达。将SC重组蛋白鉴定和纯化后,按常规免疫程序制备多克隆抗体。利用Western-blot对抗SC重组蛋白的多克隆抗体进行鉴定,结果显示,该抗体能特异性识别猪初乳中的SIgA免疫球蛋白,而与猪初乳中的IgG不发生反应。因此,抗SC重组蛋白的多克隆抗体可以作为抗SIgA免疫球蛋白的特异性抗体,为进一步建立SIgA的检测方法及黏膜免疫的研究奠定基础。
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