观察嘌呤霉素(PAN)对足细胞凋亡率、足细胞分子CD2相关蛋白(CD2AP)和磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K) p85表达的影响,探讨CD2AP异常表达在足细胞凋亡中的意义。
方法体外培养小鼠肾小球足细胞系,设立对照组及PAN刺激组,处理后8 h、24 h和48 h观察细胞形态并摄像,采用流式细胞仪检测足细胞凋亡率,实时荧光定量PCR检测CD2AP mRNA的表达,Western blot法检测CD2AP和PI3K p85蛋白的表达,间接免疫荧光标记在共聚焦显微镜下观察CD2AP与PI3K p85的共定位分布。
结果PAN刺激后足细胞胞体缩小,出现足突回缩至逐渐消失,失去细胞间连接;与对照组比较,PAN组足细胞24 h和48 h凋亡率[(7.52±1.35)%、(17.09±2.53)%比(4.32±0.81)%、(6.81±1.34)%]均明显升高,差异均有统计学意义(t=4.98、8.79,P均<0.05);PAN刺激组CD2AP mRNA表达各时间点均较对照组明显降低(0.34±0.12、0.46±0.21、0.47±0.10比0.62±0.23、0.97±0.14、0.96±0.23),差异均有统计学意义(t=2.64、4.95、4.79,P均<0.05);24 h和48 h CD2AP(0.36±0.12、0.27±0.15比0.64±0.23、0.51±0.20)与PI3K p85(0.61±0.20、0.48±0.20比0.97±0.31、0.84±0.35)蛋白表达均显著降低,差异均有统计学意义(t=2.64、2.35、2.31、2.40,P均<0.05);CD2AP在足细胞的分布由均匀细丝状分布于胞质足突及核内转为不连续粗颗粒状集中分布于核周,CD2AP与PI3K p85的共定位关系也明显异常。
结论PAN诱导足细胞凋亡过程中CD2AP和PI3K p85表达及分布异常,说明CD2AP可能通过PI3K通路在足细胞的凋亡中起重要作用。