论文部分内容阅读
目的制备抗CD4人-鼠嵌合抗体.方法从分泌抗CD4单克隆抗体的杂交瘤细胞中提取总RNA,通过RT-PCR扩增出VH和VL的DNA片段,对VH和VL进行DNA序列测定和分析,证实VH和VL具有小鼠Ig可变区完整的结构功能后,将VH亚克隆至重链表达载体pγ1-Expr,VL亚克隆至轻链表达载体pκ-Expr,转化XL2-Blue细菌,通过菌落或质粒PCR筛选阳性克隆.通过电转染将VH-pγ1、VL-pκ共转染至小鼠骨髓瘤细胞X63Ag8.653,通过G418筛选、ELISA和免疫荧光鉴定.结果得到分泌抗CD4人-鼠嵌合抗体的阳性转染瘤细胞克隆.所得到的嵌合抗体在体外对PHA和IL-2诱导的PBMC增殖具有抑制作用.结论人-鼠嵌合抗体得到成功表达,并有可能作为免疫抑制剂应用于抗移植排斥和自身免疫疾病的治疗.