pcDNA3-HIF-1α真核表达质粒的构建及其在MCF-7细胞中的表达

来源 :基础医学与临床 | 被引量 : 0次 | 上传用户：wukai110032

【摘要】

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目的构建低氧诱导因子1α（HIF-1α）真核表达质粒,并在MCF-7细胞中进行功能验证.方法利用RT-PCR扩增带有Xba Ⅰ和HindⅢ酶切位点的HIF-1α编码基因,插入T载体测序正确后,克隆

【作者】

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苏燕李宏伟张静修瑞娟

【机构】

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中国医学科学院中国协和医科大学微循环研究所

【出处】

：

基础医学与临床

【发表日期】

：

2006年8期

【关键词】

：

低氧低氧诱导因子-1Α 质粒构建基因表达凋亡 hypoxia hypoxia inducible factor-1 α plasmid construc

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目的构建低氧诱导因子1α（HIF-1α）真核表达质粒,并在MCF-7细胞中进行功能验证.方法利用RT-PCR扩增带有Xba Ⅰ和HindⅢ酶切位点的HIF-1α编码基因,插入T载体测序正确后,克隆入pcDNA3真核表达载体,然后将其转染MCF-7细胞.Western blot和双荧光素酶报告基因法分别检测HIF-1α表达及其DNA结合活性;实时定量PCR检测HIF-1α对低氧诱导基因C-MET mRNA表达的影响;Caspase3/7活性检测来初步判断HIF-1α对低氧MCF-7细胞凋亡的影响.结果

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