【摘 要】
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目的 建立一种简便实用的可同时提取原代神经元和原代星形胶质细胞的培养方法.方法 选用出生24 h的SD乳鼠,75％乙醇消毒,断脊法处死.用眼科镊拨开脑膜各层,取出完整大脑.游离海马,剥离血管,木瓜蛋白酶消化,然后吹打、离心、过滤,以合适密度种植于相应培养皿.4h后更换培养基,以后每2天半量换液培养.第5天用免疫荧光法鉴定细胞种类,计算神经元纯度;第7天待神经元形成网络后进行后续实验.将剩余大脑皮层进行胶质细胞的提取.用同样方法剥除脑膜、血管,胰酶消化,过滤,差速贴壁.以合适密度种植于培养瓶,用梯度血清法纯
【机 构】
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贵州医科大学临床医学院病理学教研室,贵阳 550000;贵州医科大学附属医院病理科,贵阳 550000
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目的 建立一种简便实用的可同时提取原代神经元和原代星形胶质细胞的培养方法.方法 选用出生24 h的SD乳鼠,75％乙醇消毒,断脊法处死.用眼科镊拨开脑膜各层,取出完整大脑.游离海马,剥离血管,木瓜蛋白酶消化,然后吹打、离心、过滤,以合适密度种植于相应培养皿.4h后更换培养基,以后每2天半量换液培养.第5天用免疫荧光法鉴定细胞种类,计算神经元纯度;第7天待神经元形成网络后进行后续实验.将剩余大脑皮层进行胶质细胞的提取.用同样方法剥除脑膜、血管,胰酶消化,过滤,差速贴壁.以合适密度种植于培养瓶,用梯度血清法纯化细胞.第7天后,鉴定并计算星形胶质细胞纯度,选5代之内的细胞进行后续实验.结果 提取的原代神经元和神经胶质细胞形态良好,杂质少,纯度高,纯度分别为(95±0.62)％和(94±0.73)％,可以用于后续的实验.结论 该方法所需试剂和设备简单,提取的细胞纯度高、质量好,是一种方便实用的可以同时进行原代神经元与原代星形胶质细胞培养的方法.
其他文献
目的 探讨HSP70-TLR4-MyD88信号通路在肾脏AA淀粉样变中的作用机制,以及Hsf1基因对其通路的调节作用.方法 使用Hsf1基因敲除小鼠构建肾脏AA淀粉样变模型,以野生型小鼠为对照.模型制备成功后,从各组小鼠肾脏组织中提取mRNA进行检测评估;使用刚果红和免疫组化染色比较各组肾脏AA淀粉样物质的沉积程度.构建替普瑞酮(GGA)治疗组模型,对比治疗组与实验组肾脏淀粉样变情况.结果 淀粉样变诱导试验后,Hsf1+/+小鼠肾脏HSP70 mRNA表达量显著升高,而Hsf1-/-小鼠肾脏组织HSP70
EB病毒(Epstein-Barr virus,EBV)主要通过唾液进行传播,人群普遍易感,病毒感染人体后主要以潜伏和裂解两种模式存在.目前已知EBV与多种淋巴瘤及淋巴组织增殖性疾病密切相关,EBV潜伏期表达产物在病毒致病过程中发挥了重要作用.该文旨在对EBV的感染特点及其与淋巴瘤和淋巴组织增殖性疾病的关系进行综述.
目的 探讨结直肠无蒂锯齿状腺瘤/息肉(sessile ser-rated adenoma/polyp,SSA/P)的临床病理学特征.方法 回顾性分析223例SSA/P和4例SSA/P伴异型增生的临床病理学特征,并复习相关文献.结果 223例SSA/P中,男性109例,女性114例;年龄24～87岁,中位年龄58岁;好发于右半结肠(74.0％);病变直径0.2～2.5 cm.内镜下为边界模糊的扁平状或广基(无蒂)的纵向发育型息肉.体积大的SSA/P更易伴异型增生(P<0.05).结论 SSA/P是一种与普通
目的 探讨乳腺癌肿瘤间质(tumor stroma,TS)中CD68+、CD11c+和CD163+肿瘤相关巨噬细胞(tumor associ-ated macrophages,TAM)的免疫组化表达及与临床病理特征、生存期的关系.方法 采用免疫组化法检测81例乳腺癌和50例乳腺腺病组织中CD68、CD11c和CD163的表达,将乳腺癌TS中的TAM(M1、M2)进行量化分析,按比率中位数0.8为界,分为高M2/M1表达组和低M2/M1表达组,比较两组的临床病理特征、总生存期(overall surviva
目的 探讨微管相关蛋白1轻链3β(microtubule-asso-ciated protein 1 light chain 3β,LC3B)及选择性自噬接头蛋白1(sequestosome 1,SQSTM1)在膀胱尿路上皮癌组织中的表达及其临床意义.方法 采用免疫组化MaxVision法检测LC3B与SQSTM1在48例膀胱尿路上皮癌组织及7例正常膀胱黏膜组织中的表达,并分析其表达与膀胱尿路上皮癌临床病理特征的关系.结果 LC3B、SQSTM1在膀胱尿路上皮癌中的阳性率高于正常组织,差异有统计学意义(χ
目的 探讨具有乳头样核特征的非浸润性甲状腺滤泡性肿瘤(non-invasive follicular thyroid neoplasm with papillary-like nuclear features,NIFTP)的临床病理学特征.方法 回顾性分析7例NIFTP的临床病理学特征及免疫表型,并进行BRAF V600E基因突变检测.结果 眼观:肿瘤最大径0.6～3.0 cm,可见薄层包膜或界清.镜检:肿瘤均由大小不等的滤泡组成,细胞核增大、重叠、有核沟,局部呈毛玻璃样,无发育良好乳头,无包膜、血管侵犯
免疫组化染色是一种研究组织形态和原位蛋白表达的重要技术,对肿瘤的诊断、鉴别诊断、指导治疗、判断预后等方面具有重要作用[1] .组织切片可以为细胞和组织生物学提供丰富的信息.在同一张切片上,传统免疫组化染色通常只能对1 ～2 种抗原进行染色分析,随着精准医学的发展和蛋白质组学更加深入的研究,如不同蛋白间的相互作用,共表达和共定位,表达量与空间和距离关系,肿瘤异质性分析,细胞表型统计,肿瘤微环境呈现等均需在一张组织切片上同时检测多个靶标分子[2 -5] .
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目的 探讨伴骨骼肌损害的嗜酸性肌筋膜炎的临床特点及病理改变.方法 对5例伴骨骼肌损害的嗜酸性肌筋膜炎的临床特征及组织病理学进行回顾性分析,采用免疫组化EnVision法检测淋巴细胞CD4、CD8、CD20和CD68的表达,并复习相关文献.结果 5例患者临床主要表现为不同程度的肢体肿胀,肌肉疼痛无力,均以肢体远端为主.其中4例患者局部皮肤有色素沉着和橘皮样改变,3例出现双手握拳困难,呈“空心拳”征.肌电图检查肌源性损害4例,血清肌酸激酶升高3例.5例患者骨骼肌和筋膜组织病理活检:均可见不同程度的肌筋膜增厚和