【摘 要】
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目的:研究对香豆酸组合物(HDE)对骨髓增生异常综合征(MDS)细胞株SKM-1细胞增殖的抑制作用及诱导凋亡情况,为MDS的临床治疗提供实验基础.方法:采用MTT法检测HDE对SKM-1细胞株的生长抑制作用;TRAP-PCR银染法检测端粒酶活性;siRNA法抑制端粒酶相关hTERT基因表达;流式细胞术检测siRNA干扰前后HDE诱导SKM-1细胞凋亡率变化;Western blot检测siRNA干扰前后凋亡相关蛋白表达变化.结果:0.05～0.125mg/mL HDE作用SKM-1细胞24h后的存活率分别
【机 构】
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浙江中医药大学附属第一医院血液科,杭州310006;浙江中医药大学第一临床医学院,杭州310053
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目的:研究对香豆酸组合物(HDE)对骨髓增生异常综合征(MDS)细胞株SKM-1细胞增殖的抑制作用及诱导凋亡情况,为MDS的临床治疗提供实验基础.方法:采用MTT法检测HDE对SKM-1细胞株的生长抑制作用;TRAP-PCR银染法检测端粒酶活性;siRNA法抑制端粒酶相关hTERT基因表达;流式细胞术检测siRNA干扰前后HDE诱导SKM-1细胞凋亡率变化;Western blot检测siRNA干扰前后凋亡相关蛋白表达变化.结果:0.05～0.125mg/mL HDE作用SKM-1细胞24h后的存活率分别为96.70％、84.17％、50.47％、32.07％,显著低于空白对照组(P＜0.05),48h后的存活率分别为95.90％、91.70％、39.27％、19.07％,显著低于空白对照组(P＜0.05),且0.1、0.125mg/mL的HDE作用SKM-1细胞48h后的存活率显著低于24h(P＜0.05).SKM-1细胞端粒酶活性显著高于药物(HDE)作用组及正常对照(BMSCs)组(P＜0.05).与BMSCs组比较,SKM-1组细胞凋亡水平无显著变化;与SKM-1组比较,SKM-1+HDE组、SKM-1+hTERT-siNC组、SKM-1+hTERT-siRNA组、SKM-1+hTERT-siRNA+HDE组细胞凋亡水平显著上调(P＜0.05);与SKM-1+hTERT-siRNA组比较,SKM-1+hTERT-siRNA+HDE组细胞凋亡水平显著上调(P＜0.05).HDE作用SKM-1后,与SKM-1组比较,SKM-1+HDE组hTERT的表达显著降低(P＜0.05);与SKM-1+hTERT-siRNA组比较,SKM-1+hTERT-siRNA+HDE组Cleaved-Caspase3、Cleaved-Caspase8、Cleaved-PARP的表达显著增加(P＜0.05).结论:HDE能够诱导MDS细胞株SKM-1凋亡,并且与死亡受体途径相关,抑制端粒酶的活性,可以增加HDE对SKM-1的杀伤作用.
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