【摘 要】
：
目的表达、纯化结核分枝杆菌（Mycobacterium tuberculosis,M. tb）Rv1886c重组蛋白（Ag85B）,并免疫小鼠制备多克隆抗体。方法采用PCR技术从M. tb（H37Rv）基因组中扩增Rv1886c基因,克隆至pET-28a质粒中,构建重组表达质粒pET-28a-Rv1886c,转化E. coli BL21（DE3）,IPTG诱导表达Ag85B蛋白,并对表达条件进行优
【机 构】
：
宁夏医科大学基础医学院病原生物学与免疫学系
【基金项目】
：
宁夏回族自治区重点研发项目（2018BEB04033）； 宁夏常见传染病防治重点实验室开放课题（XZ2021011）；
论文部分内容阅读
目的表达、纯化结核分枝杆菌（Mycobacterium tuberculosis,M. tb）Rv1886c重组蛋白（Ag85B）,并免疫小鼠制备多克隆抗体。方法采用PCR技术从M. tb（H37Rv）基因组中扩增Rv1886c基因,克隆至pET-28a质粒中,构建重组表达质粒pET-28a-Rv1886c,转化E. coli BL21（DE3）,IPTG诱导表达Ag85B蛋白,并对表达条件进行优化。采用Ni-NTA His亲和层析柱纯化目的蛋白;将纯化的蛋白经皮下注射BALB/c小鼠,制备多克隆抗体,ELISA法检测抗体滴度,Western blot法检测抗体特异性。结果重组表达质粒pET-28a-Rv1886c经双酶切和测序鉴定证明构建正确;重组蛋白的最适表达条件为0.5 mmol/L IPTG 37℃诱导表达4 h,获得了相对分子质量约30 000的重组蛋白;纯化的重组蛋白纯度达90%以上,蛋白浓度约为1.5 mg/mL;免疫BALB/c小鼠后获得的抗Ag85B血清具有良好的抗原结合特性,且抗体滴度达1︰51 200。结论成功获得了高纯度的Rv1886c蛋白Ag85B,并制备了小鼠抗Ag85B多克隆抗体,为进一步研究TB的血清学早期诊断奠定了基础。
其他文献
死亡是博尔赫斯作品永恒的主题之一。本文以博尔赫斯短篇小说《永生》为例,同时联系加缪《西西弗神话》中的存在主义精神结合分析,可以看出博尔赫斯对死亡的哲思,对虚无主义和荒诞生活的反抗。
近年来,推动积极老龄化与健康老龄化建设受到社会广泛关注与高度重视,这也顺应了我国今后一段时间的基本国情。文章通过对存在主义的关键话语进行解读,建构老年主体性概念,即老年人自我的社会构建与自由的解放,从中理解老年主体性本身存在的局限,包括区域化的人生、再创造的生命历程、家庭指导关怀与爱、道德责任与意识的四维困境,提出构建老年主体的意向性、本真性及共同成长的关系,以获得主体上的宽舒,实现老年人生的自由
《金色笔记》是英国当代女作家多丽丝·莱辛突破传统小说结构的一部长篇小说。《金色笔记》不分章节,由一个故事,五本笔记构成,主要讲述了女主人公安娜·沃尔夫的个人生活及自我追求直至重新开始写作,最终实现自我超越的过程。本文主要从存在主义中的存在、自由、人道主义理论角度去解读小说中安娜的自我超越。面对分裂、混乱的人生,安娜最终找到了人生的价值,存在即是自由,维持价值存在的正是她自己。
现象学存在主义通过20世纪法国哲学三大主题（语言、身体、他者）的转向合谋瓦解了早期现代以内在性为指向的意识哲学、主体形而上学。戈达尔的电影将现象学存在主义所建构存在（being）的中心命题进行了影像化的表达,其早期电影的特性具体表现为:非中心化叙事的散文电影、身体出场的体感扩充及他者浮现的相对他性三个方面。而二者背后的哲学理路共同指向了在主体性形而上学瓦解的过程中所产生的当代法国哲学的现代性危机。
流速在泥石流防治工程设计中处于重要地位,如何有效获取准确的流速十分关键。在泥石流拦挡工程设计时往往采用平均流速,而对近年来陇南地区泥石流拦挡工程的调查,发现泥石流流速在横向断面分布上具有一定的不均匀性,导致部分拦挡坝体中部易遭受损毁。在"甘肃武都火烧沟"公式基础上,基于冲淤平衡等合理化假设,利用数学积分原理,提出泥石流横向分布计算公式,可供防治工程设计时参考借鉴。
生物多样性是一国社会经济发展最重要的物质基础之一。中国现有的生物多样性法律体系存在“主流化”规范缺失、对生物安全保障回应不足等问题。在生态文明的语境下，应基于生态发展观、生态协同观和生态合作观，实现多元价值协调，遵循整体主义的生物多样性法治路径，推动全球生物多样性治理。为此，应充分利用环境法法典化的契机，推进生物多样性法律体系化；以风险预防为原则，健全和完善关键制度；健全协调机制，完善生物多样性管
随着国家对塑料污染治理从原来的"限塑"提升到"禁塑",而可降解塑料PBAT的原材料主要有1,4-丁二醇、对苯二甲酸和己二酸,生产1吨PBAT需要0.43吨1,4-丁二醇,由于1,4-丁二醇产品的市场巨大需求,促进了该行业的飞速发展。1,4-丁二醇简称BDO,是有机化工和精细化工的重要原料,在医药、汽车、化工和纺织等领域得到了广泛的应用,其主要用来生产γ-丁内脂、四氢呋喃、聚四亚甲基醚二醇、聚氨脂和
为了制备奶山羊乳铁蛋白的多克隆抗体,为进一步的试验提供材料,该研究运用软件分析并选取最适合原核表达的LF序列进行扩增,将扩增出的序列与pET-32a（+）质粒连接,形成原核表达质粒pET-32a-LF,将质粒转化入大肠杆菌,在最适条件（37℃、0.5 mmol/L IPTG、4 h）下诱导表达出大量蛋白。通过Ni-NTA Resin法将蛋白纯化后皮下注射4月龄新西兰大耳兔,免疫注射结束后采集抗体血
深度学习是将个人内在的对学习的需要作为动力,通过理解帮助学习,学习者有能力对新的内容进行批判性的学习,并将新内容与原有知识进行联系,具有将原有的知识在新的情境中运用的能力[1].基于问题链教学的初中数学深度学习是基于知识的内在结构和整体特征,以问题为主线,以知识为载体,引导学生从知识学习走向思维发展,从低阶思维走向高阶思维[2].问题链的设计与完善,有助于理清整节课的主线"脉络",其清晰的条
肝素可剂量依赖性地抑制化脓隐秘杆菌（Trueperella pyogenes）黏附宿主细胞。本研究旨在认识化脓隐秘杆菌肝素结合蛋白及其黏附特性,采用肝素琼脂糖凝胶从化脓隐秘杆菌裂解物中提取蛋白,运用蛋白质质谱和免疫印迹对所提取的蛋白质进行鉴定。采用免疫印迹检测所提取蛋白质与自然感染化脓隐秘杆菌山羊血清的反应原性。制备重组蛋白,对重组蛋白的的肝素结合活性及肝素、抗血清对肝素结合活性的抑制作用进行了分